タンパク質の核・細胞質間輸送機構の遺伝学的解析

蛋白质核质转运机制的遗传分析

• 批准号: 07780627
• 负责人: 木俣 行雄
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780627/
• 关键词: 核; タンパク質輸送; 核膜孔; GFP; NUP133; ヌクレオポーリン

核蛋白質の核への移行に障害ある酵母(S.cerevisiae)変異株の取得と解析を目的として研究を進め、以下の結果を得た。A)蛋白質の核への移行の可視化を目的とし、クラゲ由来の緑色蛍光蛋白質(GFP)cDNAとアフリカツメガエル由来の核蛋白質nucleoplasmin cDNAを融合させて酵母細胞内で発現させ、以下の知見を得た。1)GFPと融合させてもnucleoplasminは核に移行し、その移行は緑色の蛍光により可視化された。2)酵母の培養温度が上昇するにつれ、GFPの発する蛍光強度は著しく低下した。この原因は、GFPの蛍光体形成が高温ではうまくなされないためだと考えられた。B)nucleoplasminを発現する温度感受性変異株500種を対象とし、増殖制限温度で培養したときのnucleoplasminの局在を蛍光抗体染色法により調べた。その結果、核蛋白質の核への移行に障害があると考えられる酵母変異株が3種選択された。その中の1種は、nucleoporinの1種であるNUP133遺伝子の変異株であった。

The study on nuclear protein migration in yeast (S. cerevisae) was carried out with the following results. A) Visualization of protein nuclear migration The following information was obtained from fusion of GFP cDNA and GFP cDNA. 1)GFP fusion and nucleoplasmin migration, and migration and green light visualization. 2)Yeast culture temperature increases, GFP light intensity decreases. The reason for this is that GFP is formed at a high temperature. B) Temperature sensitivity of nucleoplasmin development 500 kinds of target cells, growth limit temperature of nucleoplasmin development, and light antibody staining As a result, three kinds of yeast mutants were selected from among the three strains. NUP133 is a variant of NUP133.

项目成果

Lim Chun Ren et al: "Thermosensitivity of Gveen Fluovescent Protein Fluorescence Vtilized to Reveal Novel Nuclear-like Compar tuent in a mutant Nucleoporin NSP" Journal of Biochemistry. 118. 13-17 (1995)

Lim Chun Ren 等人：“利用 Gveen 荧光蛋白荧光的热敏性揭示突变核孔蛋白 NSP 中的新型核样比较”《生物化学杂志》。