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新規セリンプロテアーゼの脳内分布-免疫組織化学的研究

一种新型丝氨酸蛋白酶的脑分布——免疫组织化学研究

基本信息

批准号：
07780681
负责人：
吉田成孝
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780681/
关键词：
ニューロプシンセリンプロテアーゼ脳海馬免疫組織化学

项目摘要

ニューロプシンは、当教室においてそのcDNAをクローニングした新規のセリンプロテアーゼで、そのmRNAは脳内では辺縁系に特異的に発現する。今回の研究では、この遺伝子より精製される酵素蛋白が脳内でどこに発現しているかを免疫組織化学的に検討を行った。用いた抗体は、大腸菌に発現させたリコンビナントニューロプシンを抗原として作製した家兎ポリクローナル抗体とバキュロウイルスを用いて昆虫細胞に強制発現させたリコンビナントニューロプシンを抗原として用いたラットモノクローナル抗体である。ウエスタンブロティングによる抗体の特異性の検討を行った結果、モノクローナル抗体がリコンビナントニューロプシンに最も強く反応し、マウス海馬では可溶性画分において単一の陽性バンドが検出された。これらの結果よりこの抗体はニューロプシンを特異的に認識する抗体であると考えられた。マウス脳を用いて免疫組織化学をこの抗体を用いて行った。様々な固定法を試みたところPLP固定を行った脳の組織を凍結せずにマイクロスライサ-により作製した切片が最も免疫反応性が良かった。この方法によりマウス成獣の脳を用いてニューロプシン蛋白の分布を検討したところin situ hybridizationの結果にみられたように海馬のCA1-3の錐体細胞に免疫陽性細胞がみられた。他方in situ hybridaizationにより陽性シグナルが検出されない歯状回や新皮質においてはニューロプシン蛋白陽性細胞は認められなかった。

In the classroom, there are some problems in the classroom, such as the classroom, the cDNA, the classroom, the classroom and the classroom. This time, we have studied the expression of enzyme protein in this study, and we have found that there is a significant difference in the expression of enzyme protein in immunohistochemistry. Use antibodies, bacteria, antigens, antibodies, antibodies, antibodies. The results of the specific antibody test, the antibody, the antibody, The results show that there is a significant difference between the antibody level and the antibody level. Immunocytochemistry was used to detect antibodies. The method of fixation, the method of PLP fixation, the tissue tissue, the tissue. The method was used to determine the distribution of protein in serum. The results showed that the body cells were immunized with CA1-3 cells, and the cells were immunized. The other side of the in situ hybridaization said that the new skin was in the shape of a new skin, and that the protein was not found in the cells.