無機リン酸によるナトリウム/リン酸共輸送担体遺伝子発現調節機構の解明

阐明无机磷酸盐对钠/磷酸盐共转运载体基因表达的调控机制

• 批准号: 07770105
• 负责人: 竹谷 豊
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770105/
• 关键词: 無機リン酸; 輸送担体; 腎臓; ビタミンD; 遺伝子発現調節

生体における無機リン酸恒常性維持は、腎臓におけるヒトNa^+/リン酸共輸送担体による再吸収活性を調節することで行われている。特に細胞外無機リン酸レベルの変化による本輸送活性の調節は、重要である。本研究では、ヒト腎臓に発現する2つのNa^+/リン酸共輸送担体(NaPi-3およびNPT-1)のゲノム遺伝子をクローニングし、その5′-転写調節領域の塩基配列の決定およびこれらの遺伝子発現調節の分子機構について検討を行った。ヒトゲノムDNAライブラリーをスクリーニングした結果、両遺伝子の5′-転写調節領域を含むクローンを得ることができ、それぞれについて塩基配列を決定した。NaPi-3遺伝子の転写開始点より上流領域には、典型的なTATA-box、cAMP応答配列やAP-1結合配列の他、3ヶ所のダイレクトリピート様構造(DR-like)を見出した。一方、NPT-1遺伝子の5′-上流領域には、2ヶ所のCCAAT-boxやオクタマ-配列(ATTTGCAT)が見いだされたが、典型的なTATA-boxは見られなかった。次に、ルシフェラーゼアッセイ法を用いて両遺伝子の転写活性に重要な因子を検討したところ、ビタミンDが、2つのNa^+/リン酸共輸送担体(NaPi-3およびNPT-1)の発現に重要な役割を果たしているものと考えられた。さらに、NaPi-3遺伝子の5′-転写調節領域には、酵母のリン応答配列(CACGTG)が存在することを見出した。そこでこの配列を含む合成DNAを作成し、普通食および低リン食で飼育したラットの核抽出液を用いてゲルシフトアッセイを行ったところ、低リン食による血中リンレベルの低下に伴い増加するバンドを検出した。この結合因子は、リン応答性の転写調節因子であると考えられ、また、酵母と同様の配列を認識したことから、おそらく真核生物間で保存されているリン応答因子である可能性が考えられた。

In vivo, inorganic acid homeostasis is maintained, and in vivo, Na +/Ca co-transport supports are regulated. In particular, the regulation of extracellular inorganic acid metabolism is important. In this study, we investigated the molecular mechanism for determining the molecular structure of the 5′-mer regulatory domain of Na^+/CN acid co-transport carriers (NaPi-3 and NPT-1), which are involved in the development of 2-mer, 3-mer and 4-mer proteins. The 5′-mer regulatory domain of the DNA molecule is determined by the sequence of DNA molecules. The starting point of writing NaPi-3 gene is in the upper domain, and typical TATA-box, cAMP, and AP-1 binding sequences are also found in the DR-like structure of NaPi-3. One side, NPT-1 legacy of the 5′-upstream field, 2 of the CCAAT-box-(ATTTGCAT), typical TATA-box. In addition, the important factors for the development of Na^+/CN acid co-transport carrier (NaPi-3 or NPT-1) are discussed in detail. In addition, the 5′-mer regulatory domain of NaPi-3 gene has been found in the presence of CACGTG. This sequence contains synthetic DNA, and is used in the production of DNA from normal and low levels of food. The binding factor, the response factor, the adjustment factor, the yeast and the homologous sequence recognition factor, the response factor and the possibility of the eukaryote preservation factor.

项目成果

Y.Taketani: "Structure of the human renal phosphate transporter (NaPi-3) gene" Journal of Bone and Mineral Research. 10. S155 (1995)

Y.Taketani：“人肾磷酸转运蛋白（NaPi-3）基因的结构”《骨与矿物质研究杂志》。