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創薬を指向するプロスタグランジンの新規細胞外放出輸送担体の同定と機能解析

用于药物发现的新型前列腺素细胞外释放转运蛋白的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
16J03057
负责人：
田中伸明
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J03057/
关键词：
プロスタグランジン輸送担体 ABCC4

项目摘要

今年度は前年度の結果から明らかとなったH+勾配依存的プロスタグランジン（PG）E2輸送のプロファイルを解析した。また、PGD2を輸送基質とすることが明らかとなったATP-binding cassette transporter C4（ABCC4）について、抗原刺激後の肥満細胞でPGD2放出に寄与することを検証した。以上の検証によりPG・トロンボキサンの細胞外放出過程を解明することを試みた。【研究成果の具体的内容】H+勾配依存的輸送速度はPGE2 500 μMまでに飽和性を示さなかった。また、H+勾配依存的PGE2輸送に対してアセチルサリチル酸、サリチル酸、p-ニトロ安息香酸はそれぞれ64%、62%、70%の有意な阻害効果を示した。このことから、芳香族モノカルボン酸を輸送基質とする輸送担体がH+勾配依存的PGE2輸送に大きく寄与する可能性を示した。抗原刺激により脱顆粒を引き起こす肥満細胞モデルとして汎用されるRBL-2H3細胞を用い、DNP-HSA（50 ng/mL）による抗原刺激後のPGD2放出に対してABCC4選択的阻害薬Ceefourin 1（2.5 μM）を加えたところ、細胞外PGD2量は22%有意に減少した。また、この時薬液中のβ-hexosaminidase活性に変化はみられなかった。このことから、RBL-2H3細胞においても ABCC4はPGD2細胞外放出に寄与し、かつ脱顆粒とは独立した細胞外放出経路として機能していることを明らかとした。【研究成果の意義・重要性等】芳香族カルボン酸を輸送基質とする輸送担体がH+勾配依存的PGE2輸送を担う可能性を示し、分子同定に有用な情報になるものと期待される。また、肥満細胞においてABCC4は脱顆粒に依存しないPGD2放出経路として機能し、アレルギーのみならずがん組織における血管新生抑制作用の発現に寄与する可能性が示唆された。

This year's results from the previous year are different from those of the previous year. ATP-binding cassette transporter C4 (ABCC4) is the first cell to release PGD2 after antigen stimulation. The above evidence shows that the extracellular release process of the protein is not clear. [Details of research results] H+ coordination dependent transport rate is PGE2 500 μM and saturation is shown. H+-ligand dependent PGE2 transport was found to be an intentional barrier to 64%, 62%, and 70% of the transport of citric acid, citric acid, and p-benzoic acid. The possibility of H+-dependent PGE2 transport by aromatic transport carriers is demonstrated. Antigen stimulation induced apoptosis in RBL-2H3 cells and DNP-HSA (50 ng/mL) induced apoptosis in RBL-2H3 cells. The inhibition of PGD2 release in ABCC4 cells induced by Cefourin 1 (2.5 μM) was increased and extracellular PGD2 content was decreased by 22%. The β-hexosaminase activity in the serum was detected by PCR. RBL-2H3 cells are capable of releasing cells from ABCC4 and PGD2 cells independently. [Significance and importance of research results] Aromatic acid transport matrix, transport carrier, H+ ligand dependent PGE2 transport possibility, molecular identity, useful information and expectations The possibility that ABCC4 is dependent on PGD2 for its function and angiogenesis inhibition in tissues is demonstrated.