生体時計の発生分化制御に関わる遺伝子機構の解明

阐明控制生物钟发育和分化的遗传机制

• 批准号: 11F01412
• 负责人: 岡村 均
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11F01412/
• 关键词: 生体時計; 肝細胞明; 細胞分裂; 増殖効率; 初代培養; 生体リズム; 時計遺伝子

細胞の増殖のタイミングが、抑制性キナーゼであるWee1等の制御を介し、生体時計で制御されていることは周知の事実である。今回、時計遺伝子欠損マウス(CGDマウス)での肝臓再生の異常を検索することにより、生体時計の発生分化制御にかかわる時計遺伝子機構を検索した。まず、マウス肝臓の70%部分肝切除後を施行し、野生型とCGDマウスとの、再生肝の再生能力の差を検索した。そのためにサンプリング1時間前にBrdUを投与しその時点でのDNA合成をマーキングし、術後様々な時間でサンプリングした。抗Ki67抗体にて細胞周期に入った細胞を同定し、anti-BrdU抗体やEdU-Click反応でS期の細胞を同定し、これらの二重染色により、手術後各時間におけるS期細胞比率等の変動を検討した。その結果、CGDマウスと野生型マウスには、細胞増殖効率に明らかな差は認められなかった。また、部分肝切除術後の発がん性を含む病変を検索しているが、現在までには異常が認められなかった。一部のマウスに炎症性細胞浸潤が認められた。以上の所見は、肝細胞の細胞周期を1サイクル回る時間に明らかな差が無いことをあらわすが、細胞発生が異常かどうかわからない。生体成熟肝細胞では、基本的には細胞分裂を行なわないが、発生期の肝細胞は分裂する。そこで、時計遺伝子による時計遺伝子の細胞発生への関与をより詳細に検索するため、生後3週のCGDマウスの肝臓から採取した肝細胞の初代培養を用いて細胞発生異常の検索を開始した。野生型マウスから採取した肝細胞の分裂頻度は25%-30%であったが、CGDマウスも同程度であった。この分裂頻度は、単核細胞も、2核細胞も同じであった。現在さらに、初代培養細胞系を用いて、生体時計の発生分化制御に関わる遺伝子機構を追求している。

It is known to people that they are responsible for the control of biological agents, such as cell colonization, inhibitory agents, Wee1, and so on. This time, there is a lack of information about the CGD cycle. The liver regeneration program is often used to control the differentiation of the health system. After 70% partial hepatectomy, wild type CGD, poor regeneration ability and poor regeneration ability of regenerated liver were performed. It is important to make sure that the BrdU is used before and at the same time, and that the DNA is synthesized at the same time, and then at the same time. The cell cycle of anti-Ki67 antibody was detected by Elisa, the cell cycle of anti-anti-BrdU antibody was detected by EdU-Click anti-Elisa, the ratio of S-phase cells was detected by double staining, and the ratio of S-phase cells was detected at each time point after operation. The results of the experiment, the results of CGD test, the wild type virus infection, the cell culture rate and the cell culture rate were analyzed. The symptoms after partial hepatectomy and partial hepatectomy include the symptoms of the disease, which is now very common. A film called inflammatory cytophagia, inflammatory cytophagia, inflammatory cytopathia. The cell cycle cycle time of the above cell cycle and liver cell cycle cycle is not different from that of the normal cell cycle. The mature liver cells are divided, the basic cell division is performed in the mature liver, and the cell division is performed in the mature liver. After birth, after 3 years of birth, the first generation of CGD cells were harvested and the primary culture was started. The wild type liver cells were divided into two groups: 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, 25%, 30%, The degree of division, nuclear cell and 2 nuclear cell are the same. At present, the differentiation and differentiation of the cells of the primary culture and primary culture control the pursuit of the disease by the sub-mechanism of the plant.

项目成果

生体リズム異常と疾病:臓器の時計とその異常

生物节律异常和疾病：器官时钟及其异常

• 发表时间: 2012
• 作者: 山田 裕之;岡村 均;岡村 均
• 通讯作者: 岡村 均

Involvement of urinary bladder Connexin43 and the circadian clock in coordination of diurnal micturition rhythm.

• DOI: 10.1038/ncomms1812
• 发表时间: 2012-05-01
• 期刊: Nature communications
• 影响因子: 16.6

RNA-Methylation-Dependent RNA Processing Controls the Speed of the Circadian Clock

• DOI: 10.1016/j.cell.2013.10.026
• 发表时间: 2013-11-07
• 期刊: CELL
• 影响因子: 64.5
• 作者: Fustin, Jean-Michel;Doi, Masao;Okamura, Hitoshi
• 通讯作者: Okamura, Hitoshi

Circadian regulation of intracellular G-protein signalling mediates intercellular synchrony and rhythmicity in the suprachiasmatic nucleus.

• DOI: 10.1038/ncomms1316
• 发表时间: 2011
• 期刊: NATURE COMMUNICATIONS
• 影响因子: 16.6
• 作者: Doi, Masao;Ishida, Atsushi;Miyake, Akiko;Sato, Miho;Komatsu, Rie;Yamazaki, Fumiyoshi;Kimura, Ikuo;Tsuchiya, Soken;Kori, Hiroshi;Seo, Kazuyuki;Yamaguchi, Yoshiaki;Matsuo, Masahiro;Fustin, Jean-Michel;Tanaka, Rina;Santo, Yasuko;Yamada, Hiroyuki;Takahashi, Yukari;Araki, Michihiro;Nakao, Kazuki;Aizawa, Shinichi;Kobayashi, Masaki;Obrietan, Karl;Tsujimoto, Gozoh;Okamura, Hitoshi
• 通讯作者: Okamura, Hitoshi

Accurate determination of S-phase fraction in proliferative cells by dualfluorescence and peroxidase immunohistochemistry with 5-bromo-2'-deoxyuridine

双荧光和 5-溴-2-脱氧尿苷过氧化物酶免疫组织化学法准确测定增殖细胞中的 S 期分数

• 发表时间: 2011
• 期刊: Journal of Histochemistry Cytochemistry
• 作者: Fustin JM;Doi M;Yamaguchi Y;Hayashi H;Nishimura S;Yoshida M;Isagawa T;Suimye-Morioka M;Kakeya H;Manabe I;Okamura H;Negoro H;Doi M; Okamura H;Tanaka R; Okamura H
• 通讯作者: Tanaka R; Okamura H