癌細胞におけるLRP蛋白細胞外ドメインの糖鎖形成不全と細胞増殖抑制との関係

LRP蛋白胞外结构域糖基化缺陷与癌细胞生长抑制的关系

基本信息

批准号：
07770965
负责人：
太田智彦
金额：
$ 0.51万
依托单位：
St. Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770965/
关键词：
癌細胞周期 G0静止 cdk Cyclin Rb

项目摘要

我々は培養フラスコ中でconfluentになった後、増殖を停止し、栄養飢餓状態で300日以上G0期で停止し得る癌細胞を用い、細胞増殖停止に伴うレセプター型プロテイン・チロシン・キナーゼの細胞外ドメイン糖鎖の変化について研究した。ところが、免疫沈降およびwestern blottingに用いたLRPやLARなどの抗体の条件が悪く、他にも適切な抗体を入手できなかったため、目的の蛋白が検出できず、これらについての結論はみちびきだせなかった。しかしながら、この実験の経過中、同時にこの細胞の細胞周期関連蛋白の動態を調べたところ、G0期静止に必要な条件はcdc2蛋白の消失とRb蛋白の脱燐酸化のみで、cdk2,cyclin-A,cyclin-D1,およびMAP kinaseが発現していも、細胞はG0期に移行し得ることが判明した。さらに、G0期より細胞周期に入るときのこれらの蛋白の発現を詳細に調べたところ、G1/S期のいわゆるStart pointでcdc2,cdk2,cyclin-D1の発現、Rbの燐酸化が一斉に起こるが、この変化に先行してそれまで発現していたcdk2とcyclin-D1がいったん消失し、再びRbの燐酸化と時期を一致して発現していることが分かった。これらの結果については、次項の雑誌にて発表予定である。今後の研究課題としては、このG1/Sのstart pointに先行した、cdk2とcyclin-D1の発現消失と関連する細胞周期関連因子間の相互作用があるかどうかを検証することである。すなわち、p15,p16,p21,p27 などのcdk inhibitor(CKI)の発現状況、cdk kinase活性、cdk,cyclinとCKIの結合状態を解析した後,このG0/G1移行期を通過した細胞が、S期に移行せずに再びG0期に戻ることが可能かどうかを検索する予定である。

我们使用可以停止增殖的癌细胞在细胞生长停滞后研究了受体型蛋白酪氨酸激酶的细胞外域聚糖的变化，并可以在G0阶段停止300天以上的营养饥饿。但是，用于免疫沉淀和蛋白质印迹的抗体（例如LRP和LAR）的条件很差，其他合适的抗体也无法使用，因此无法检测到感兴趣的蛋白质，我们无法对此得出结论。然而，在此实验中，我们同时研究了该细胞中与细胞周期相关蛋白的动力学，发现静止G0期所需的唯一条件是Cdc2蛋白的消失和RB蛋白的去磷酸化，即使CDK2，Cyclin-A，Cyclin-A，Cyclin-A，Cyclin-D1和MAP KINase和MAP KINase也可以表达为g0阶段。此外，当这些蛋白的表达详细检查了从G0期进入细胞周期时，发现Cdc2，Cdk2，Cyclin-D1和RB的磷酸化在G1/S期的所谓起始点同时出现，但是在此更改之前，CDK2和Cyclin-d1又是相同的。这些结果将在下一部分中发表在杂志上。未来的研究主题是检查与细胞周期相关的因素与在此G1/S起点之前与CDK2和Cyclin-D1表达的消失相关的因素之间是否存在相互作用。也就是说，在分析CDK抑制剂（CKI）（例如p15，p16，p21和p27）的表达状态后，CDK激酶活性的结合状态以及CDK，Cyclin和cki的结合状态，我们将搜索是否再次通过此G0/G1过渡阶段返回G0相位的细胞是否可以返回到G0相中。