BRCA1-BARD1ヘテロダイマーユビキチンリガーゼによる細胞周期制御

BRCA1-BARD1 异二聚体泛素连接酶控制细胞周期

基本信息

批准号：
13043049
负责人：
太田智彦
金额：
$ 1.54万
依托单位：
St. Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13043049/
关键词：
BRCA1 BARD1 家族性乳癌ユビキチンリガーゼ変異 RINGフィンガー

项目摘要

われわれは293T細胞を用いた一過性発現の系で家族性乳癌の原因遺伝子BRCA1およびBARD1はともに単独では低いユビキチンリガーゼ活性しか持たないが、ヘテロダイマーになると、極めて高い活性を示すこと、さらに従来報告されている家族性乳癌におけるBRCA1のミスセンス変異がユビキチンリガーゼ活性を死活させる結果を得ていた。これに加え、大腸菌より精製したRING finger domain、BRCA1のN末端1-304アミノ酸およびBARD1のN末端25-189アミノ酸が活性に十分であることが判明した。このリコンビナントの系でも家族性乳癌にみられるBRCA1のミスセンス変異C61Gはこの活性を完全に死活させた。また、293T細胞に遺伝子移入により一過性発現させたBRCA1タンパク質はBARD1によって安定化され、逆にBARD1タンパク質はBRCA1によって安定化された。これまでにBRCA1がユビキチンリガーゼであることは報告されておらず、今回、この活性が乳癌の癌抑制に重要な役割を果たしていることが判明した。標的基質に関してはBRCA1(C61G)と共沈するタンパク質よりプロテインマイクロシークエンスでの同定を試みたが同定し得なかった。最近の解析の結果、BRCA1-BARD1によるポリユビキチン化にはユビキチンのLys-48以外を介したポリユビキチン鎖が存在することが判明しており、標的タンパク質の分解と、分解に関わっていないユビキチン化修飾の両方の機序による転写調節およびDNA修復機構が考えられる。この点も含め、今後プロテオーム解析にて基質の同定を試みる予定である。

在使用293T细胞的瞬态表达系统中，单独使用时，用于家族性乳腺癌的BRCA1和BARD1基因的泛素连接酶活性都低，但是当它成为异二聚体时，它们表现出极高的活性，此外，先前报道的家族性乳腺癌中BRCA1的错义突变导致了ubiquitin ligase Ligase Ligase Ligase Ligase Ligase Ligase Ligase Ligase Ligase Ligase Ligase Ligase Ligase Ligase活性。此外，发现BRCA1的N末端1-304氨基酸和BARD1的N末端25-189氨基酸的环形域纯化了。在家族性乳腺癌中也发现了BRCA1的错义突变C61G完全杀死了这一活动。此外，通过基因转移到293T细胞中瞬时表达的BRCA1蛋白通过Bard1稳定，相反，Bard1蛋白通过BRCA1稳定。迄今为止，尚未报道BRCA1是一种泛素连接酶，现在发现这种活动在抑制乳腺癌中起着重要作用。关于靶标底物，我们试图鉴定与与BRCA1（C61G）相互沉淀的蛋白质上的蛋白质微蛋白，但无法鉴定它们。最近的分析表明，BRCA1-BARD1的多泛素化含有除泛素的Lys-48以外的多泛素链，以及通过两种降解靶蛋白和泛素化修饰的降解机制的转录调控和DNA修复机制，可能与降解无关。包括这一点，我们计划尝试通过蛋白质组学分析来识别底物。