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Helicobacter pyloriの発癌遺伝子および細胞毒素遺伝子の解明

幽门螺杆菌癌基因和细胞毒素基因的阐明

基本信息

批准号：
07857021
负责人：
木村浩一
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857021/
关键词：
Helicobacter pylori gastric ulcer gastritis gastric cancer wacA genotype PCR

项目摘要

Helicobacter pyloriは、胃炎、胃潰瘍さらに胃癌との関連が指摘されている。この菌の持つ病原因子を特定することが本研究の最終的に目的である。この目的のため、まず臨床分離株76株のH.pyloriについて疾患と遺伝子型の関係を調査した。調査対象として選択したH.pyloriの遺伝子は、細胞空胞毒素蛋白の遺伝子vacAである。この細胞空胞毒素蛋白は、現在まで判っているH.pyloriの蛋白の中で、培養細胞に直接障害を引き起こす唯一の蛋白である。また、この毒素は、H.pyloriのCagA蛋白と共に十二指腸潰瘍との関連性も疑われている。研究方法であるが、まず胃カメラを施行した患者から生検材料を得、直ちにH.pylori専用培地に塗布した。約1週間程度の培養後、H.pyloriと思われるコロニーを拾って、H.pylori専用培地5枚に植え継ぎ、4日後に菌を回収して一部を菌株保存用、残りをDNA抽出用と菌種検査用に分割した。H.pyloriの同定は、ウレアーゼ、コアグラーゼ、カタラーゼテストにより行った。こうして得られた76株のH.pyloriよりDNAを抽出し、PCR法を用いてvacA遺伝子を増幅した。増幅したDNA断片を制限酵素Hpa IIで切断し、その切断パターンをアガロースゲル電気泳動により解析したところ、十二指腸潰瘍、胃癌および胃潰瘍の各疾患それぞれに対し、統計的に有意な関連性を示す遺伝子型が存在することを見出した。この結果は、H.pyloriのすべてがこれらの疾患に関与するのではなく、特定の菌株が、何らかの特別な病原因子を保有することを示唆するものである。今後、この実験結果を基に、病原因子、特に癌化に関係した病原因子を保有すると思われる菌株に対象を絞り、遺伝子ライブラリーを作製して、H.pyloriの病原因子を明らかにしたいと考えている。

Helicobacter pylori, gastritis, gastric ulcer, gastric cancer and related allegations This study aims to identify the pathogenic factors of these bacteria. To investigate the relationship between disease and genotype of 76 clinical isolates of H.pylori. Investigation of H.pylori gene and cytotoxin gene vacA gene This cytotoxin protein is now identified as the only protein in H.pylori and is directly harmful to cultured cells. The relationship between H.pylori and CagA protein in duodenal ulcer is suspected. The research method was developed and performed in the laboratory. The biological materials were obtained from the patients and coated directly on the H.pylori laboratory. After about 1 week of culture, H.pylori was cultured for 5 days, and recovered for 4 days. One part was used for strain preservation, residual DNA extraction, and strain detection. H.pylori is the same type of virus, it is lost, it is lost. 76 strains of H.pylori were isolated and amplified by PCR. Amplitude of DNA fragment restriction enzyme Hpa II was detected by PCR, and the results showed that there was a significant correlation between DNA fragment restriction enzyme Hpa II and DNA fragment restriction enzyme Hpa II in the analysis of DNA, duodenal ulcer, gastric ulcer and gastric ulcer. The results showed that H.pylori infection was related to disease, specific strains, and specific pathogenic factors. In the future, the pathogenic factors of H.pylori and H.pylori will be studied.