ウシ顆粒層細胞の分化に伴うPGF2αレセプター発現調節機構の解明

阐明牛颗粒细胞分化过程中PGF2α受体表达的调控机制

• 批准号: 08660345
• 负责人: 奥田 潔
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660345/
• 关键词: ウシ; 卵胞; 顆粒層細胞; 黄体化; PGF2αレセプター; 細胞培養; mRNA; 黄体細胞

排卵直前の卵胞を構成する顆粒層細胞においてPGF2αが合成分泌されることが明らかとなり、PGF2αが卵巣内局所調節因子として作用することが示唆されている。しかし、その生理作用は多くの研究が行われているにもかかわらず、ほとんど解明されていない。PGF2αは細胞膜上の特異的なレセプターを介して作用することから、レセプターの発現とその調節機構の解明はPGF2αの生理的役割を明らかにする上で重要な意義があると考えられる。そこで、本研究ではウシ顆粒層細胞のPGF2αレセプター発現について遺伝子レベルでの検討を試みた。1,ウシ成熟卵胞あるいは小卵胞より採取した顆粒層細胞のPGF2αレセプターmRNA(PGFRmRNA)発現量について検討した。すなわち、採取した細胞を10%ウシ胎児血清を含むDMEM/F-12で培養した(37.5C,5%CO2in air)後、Guanidine thiocyanate法に従って総RNAを抽出してNorthen blotを行い、PGFRmRNAの検出を行った。その結果、熟成細胞より採取された顆粒層細胞においては、PGFRmRNAが検出されたが、小卵胞に由来する顆粒層細胞では認められなかった。2,小卵胞に由来する顆粒層細胞の分化あるいは黄体化過程におけるPGF2αレセプター調節機構を検討しうる実験系の確立を目的として、培養期間の延長に伴う培養顆粒層細胞のステロイド合成能の変化、形態的変化を検討した。その結果、顆粒層細胞を10%子牛血清を含むDMEM/F-12でInsulinとForskolin存在下において、216時間培養することにより機能的にも形態的にも大型黄体細胞に類似した細胞に分化することが明らかになった。本研究の成果は、日本繁殖生物学会の機関誌であるJournal of Reproduction and Developmentに掲載された。以上の結果から、顆粒層細胞の分化に伴いそのPGFRmRNA発現が誘起されることが明らかにとなった。また、PGFRmRNA発現調節機構の解明に有用な顆粒層細胞の黄体化を誘起しうる培養系が確立された。

Ovulation ahead の follicle を constitute す る granular layer cells に お い て PGF2 alpha が synthetic secretion さ れ る こ と が Ming ら か と な り, PGF2 alpha が egg 巣 bureau regulatory factor と し て role す る こ と が in stopping さ れ て い る. し か し, そ の physiological function more than は く の が line わ れ て い る に も か か わ ら ず, ほ と ん ど interpret さ れ て い な い. PGF2 alpha は membrane の specific な レ セ プ タ ー を interface し て role す る こ と か ら, レ セ プ タ ー の 発 now と そ の regulator の interpret は PGF2 alpha の physical battle cut を Ming ら か に す る で な significance on が あ る と exam え ら れ る. そ こ で, this study で は ウ シ granular layer cells の PGF2 alpha レ セ プ タ ー 発 now に つ い て posthumous son 伝 レ ベ ル で の 検 please try を み た. 1, ウ シ mature follicle あ る い は small follicle よ り take し た granular layer cells の PGF2 alpha レ セ プ タ ー mRNA (PGFRmRNA) 発 now quantity に つ い て beg し 検 た. す な わ ち, take し た cells を 10% ウ シ tire where を serum containing む DMEM/F - 12 で develop し た (after 37.5 C, 5% CO2in air), Guanidine thiocyanate method に 従 っ て 総 RNA を spare し て Northen blotを line を, PGFRmRNA 検 検 line を った. そ の results, ripening cell よ り take さ れ た granular layer cells に お い て は, PGFRmRNA が 検 out さ れ た が, small follicle に origin す る granular layer cells で は recognize め ら れ な か っ た. 2, small follicle に origin す る granular layer cells の あ る い は luteinizing process に お け る PGF2 alpha レ セ プ タ ー regulator を beg し 検 う る be 験 purpose is の established を と し て, cultivation の during extended に with う granular layer cells の ス テ ロ イ ド synthesis can の variations, the morphological variations of を beg し 検 た. そ の results and granular layer cells を ZiNiu を serum containing 10% む DMEM/F - 12 で Insulin と Forskolin presence に お い て, 216 time cultivating す る こ と に よ り functionary に も form に も large-scale corpus luteum cells に similar し た cells に す る こ と が Ming ら か に な っ た. The research results of this study である were published in the であるJournal of Reproduction and Developmentに of the Japanese society of Reproductive biology された. The above <s:1> results ら ら and the <s:1> differentiation of granulosa cells に accompanied by the occurrence of <s:1> そ <s:1> PGFRmRNA が induce される <s:1> とが とが light ら にとなった にとなった にとなった. The regulatory mechanism of また and pG-frmrna development <s:1> indicates that に is useful for the <s:1> luteinization of な granulosa layer cells を, which induces the <s:1> うる culture line が and establishes された.

项目成果

SAKUMOTO Ryosuke et al.: "Progesterone release ofbovine corpus luteum in response to oxytocin in different culture systems." Journal of Reproduction and Development. 42(3). 199-204 (1996)

SAKUMOTO Ryosuke 等人：“不同培养系统中牛黄体对催产素的反应而释放黄体酮。”

OKUDA Kiyoshi: "Ovarian oxytocin receptors and their control in cattle." Journal of Reproduction and Development. 42Suppl.58-60 (1996)

OKUDA Kiyoshi：“牛的卵巢催产素受体及其控制。”

FUJITA Yasuko et al.: "In vitro differentiation of bovine granulosa cells obtained from small antral tollicles." Journal of Reproduction and Development. 42(2). 133-138 (1996)

FUJITA Yasuko 等人：“从小窦球获得的牛颗粒细胞的体外分化。”

OKUDA Kiyoshi: "Functional oxytocin receptors in bovine granulose cells." Biology of Reproduction. 56. (1997)

OKUDA Kiyoshi：“牛颗粒细胞中的功能性催产素受体。”