哺乳動物の生殖細胞を用いた内分泌撹乱化学物質の評価法の確立

哺乳动物生殖细胞内分泌干扰物评价方法的建立

基本信息

批准号：
11876058
负责人：
奥田潔
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

ブタならびにヒトを含む霊長類の黄体ではエストラジオール(E2)の合成とともにE2レセプターの存在が証明されており、黄体内機能調節因子として重要な働きをしていることが示されている。本年度は、危険度が高く優先的に対策を講じる必要のある物質を選定するためのモデルとしてウシ黄体を用いることができるかどうかを検討するために(1)E2レセプターの存在を遺伝子解析から確かめるとともに、E2の生理作用についても検討した。さらに(2)黄体に存在するE2レセプターの濃度ならびに親和性をラジオレセプターアッセイによって検討するとともに、(3)E2の作用を攪乱する可能性のあるジエチルスチルベステロール(Des)、ビスフェノール(Bis)、ダイゼイン(Da)、フタル酸エステル(Ph)、クメストロール(Coum)、ノニルフェノール(Non)との競合試験を実施した。1.RT-PCRによりウシ黄体にアロマターゼmRNAが証明され、さらにE2レセプターmRNAが証明され、また培養黄体細胞にE2を添加したところ細胞のPGF2α分泌量が優位に増加したたことから、E2が黄体内機能調節因子としてPGF2α分泌に関与している可能性が示唆された。2.次に黄体をホモジネート処理後、細胞質ならびに各文革を分取し、^3H標識E2(^3H-E2)を放射性リガンドとしてラジオレセプターアッセイを実施したところ、^3H-E2の結合はタンパク質量に依存して増加し、20C、4時間で平行に達した。スキャッチャード解析による^3H-E2の結合特性は、細胞質、核分画ともにKd=2.2〜2.8nM、Bmax=0.025〜0.45nmol/mgの範囲であった。3.^3H-E2と上記化学物質との競合試験の結果、細胞質ならびに核分画ともにDesがE2と同等あるいはより強い結合生を見せた。また、NonもDesに続いてE2と強い競合を見せた。以上の結果から、ウシ黄体がE2と競合する内分泌攪乱物質の危険度をモニターするための材料として有用であることが示唆された。上の結果は、現在、アメリカの専門誌に投稿準備中である。

已经证明了E2受体的存在以及包括猪和人类在内的灵长类动物的雌二醇（E2）的合成，这表明它们是赤乳肠内功能的调节剂的重要作用。今年，我们调查了牛叶曲体是否可以用作选择高风险并且需要优先考虑的物质的模型（1）我们通过遗传分析检查了E2受体的存在，还检查了E2的生理效应。此外，（2）通过放射线受体测定研究了存在于叶酸菌群中的E2受体的浓度和亲和力，并且（3）使用二乙基甲醇（DES），双酚（BIS），daidzein（da），phthalate ester（phthalate ester（phthalate ester（pH），phthalate（ph），coummpher（coummpher）和nony nouny noune ander ander ander ander，ander ander nouse）和竞争测试进行了竞争测试。破坏E2的动作。 1。RT-PCR在牛叶曲体中表现出芳香酶mRNA，并且还证明了E2受体mRNA，当将E2添加到培养的叶黄素细胞中时，细胞中PGF2α分泌的量主要增加，这表明E2可能与PGF2α分泌有关luteus luteus ulesus ulesus ules uneum uneum functimum condulation consumulator introtartortortortortor totor totor totor introtal intarumus uleum uneum。 2。接下来，在叶黄素均质化后，分离细胞质和培养的残基，并使用 ^3H标记的E2（ ^3H-E2）作为放射线进行了辐射感受器测定。 ^3H-E2的结合取决于蛋白质量增加，在20°C时平行4小时。 SCATCHARD分析的 ^3H-E2的结合特性范围从KD = 2.2-2.8nm和BMAX = 0.025-0.45nmol/mg在细胞质和核分裂中。 3。由于 ^3H-E2与上述化学物质之间的竞争性测试，在细胞质和核分裂中都表明，DES比E2可比或更强。 NON还表现出与E2的强烈竞争。以上结果表明，牛叶曲叶牛属是监测与E2竞争的内分泌干扰物风险的一种材料。目前，上述结果已准备好提交美国专业杂志。