权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

哺乳動物の生殖細胞を用いた内分泌撹乱化学物質の評価法の確立

哺乳动物生殖细胞内分泌干扰物评价方法的建立

基本信息

批准号：
11876058
负责人：
奥田潔
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

ブタならびにヒトを含む霊長類の黄体ではエストラジオール(E2)の合成とともにE2レセプターの存在が証明されており、黄体内機能調節因子として重要な働きをしていることが示されている。本年度は、危険度が高く優先的に対策を講じる必要のある物質を選定するためのモデルとしてウシ黄体を用いることができるかどうかを検討するために(1)E2レセプターの存在を遺伝子解析から確かめるとともに、E2の生理作用についても検討した。さらに(2)黄体に存在するE2レセプターの濃度ならびに親和性をラジオレセプターアッセイによって検討するとともに、(3)E2の作用を攪乱する可能性のあるジエチルスチルベステロール(Des)、ビスフェノール(Bis)、ダイゼイン(Da)、フタル酸エステル(Ph)、クメストロール(Coum)、ノニルフェノール(Non)との競合試験を実施した。1.RT-PCRによりウシ黄体にアロマターゼmRNAが証明され、さらにE2レセプターmRNAが証明され、また培養黄体細胞にE2を添加したところ細胞のPGF2α分泌量が優位に増加したたことから、E2が黄体内機能調節因子としてPGF2α分泌に関与している可能性が示唆された。2.次に黄体をホモジネート処理後、細胞質ならびに各文革を分取し、^3H標識E2(^3H-E2)を放射性リガンドとしてラジオレセプターアッセイを実施したところ、^3H-E2の結合はタンパク質量に依存して増加し、20C、4時間で平行に達した。スキャッチャード解析による^3H-E2の結合特性は、細胞質、核分画ともにKd=2.2〜2.8nM、Bmax=0.025〜0.45nmol/mgの範囲であった。3.^3H-E2と上記化学物質との競合試験の結果、細胞質ならびに核分画ともにDesがE2と同等あるいはより強い結合生を見せた。また、NonもDesに続いてE2と強い競合を見せた。以上の結果から、ウシ黄体がE2と競合する内分泌攪乱物質の危険度をモニターするための材料として有用であることが示唆された。上の結果は、現在、アメリカの専門誌に投稿準備中である。

The existence of E2 in the corpus luteum, including the long corpus luteum, is proved to be an important factor in the regulation of the function of the corpus luteum. This year, the risk level is high. The necessary substances are selected and used.(1) The existence of E2 is analyzed and confirmed. The physiological function of E2 is discussed. (2) The concentration and affinity of the yellow substance in the presence of E2 are discussed;(3) The possibility of disturbing the action of E2 is tested by the competition test of Des, Bis, Da, Ph, Coum and Non. 1.RT-PCR was used to detect the expression of PGF-2α mRNA in luteal cells, and E2 was used to detect the expression of PGF-2α mRNA in luteal cells. 2. After the luteal phase was processed, the cytoplasm was separated from each other, and the radioactivity of ^3H labeled E2(^3H-E2) was increased. The combination of ^3H-E2 was increased in mass dependence, and reached in parallel at 20C and 4 C. The binding characteristics of H-E2 in cytoplasm and nucleus were Kd=2.2 ~ 2.8nM and Bmax=0.025 ~ 0.45nmol/mg. 3.^ 3H-E2 and the results of the chemical competition, cytoplasmic and nuclear separation, Des and E2 are equal to each other. No, no, no. The above results show that the endocrine disruptors are dangerous and useful. The results are now available for submission.