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Cカイネースによる細胞膜Naチャネルdown-regulationの細胞内機序

C-激酶下调质膜Na通道的细胞内机制

基本信息

批准号：
08670117
负责人：
和田明彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670117/
关键词：
Sodium channel Down-regulation C kinase isoform Western blot Northern blot Binding Internalization Gene expression

项目摘要

ウシ副腎髄質細胞(発生学的に神経堤に由来する)の培養系において、細胞膜Naチャネルのdown-regulation(平成7年度報告)に関与するCカイネース(PKC)の分子種を同定し、さらに、その細胞内機序を検討した。1.副腎髄質細胞には、PKCファミリーの内、α、ε、ζのみが存在することをウエスタン・ブロットで示した。PKC活性薬TPA、PDBu処理により、α、εは細胞質より膜分画に速やかに移行し、15時間後においても膜に結合していた。2.TPA、PDBuは、濃度および時間依存的に、細胞表面^3H-サキシトキシン結合のB_<max>を減少(K_dは不変)させたが、これは薬物処理15時間後に最低値に達した。3.ノザン・ブロットでは、TPA、PDBu処理1時間後に、NaチャネルαサブユニットmRNAレベルは低下し始め、6時間後に最低値に達したが、他方、βサブユニットmRNAはむしろ増加した(生物学的に不活性な4α-TPAは効果がなかった)。TPAの濃度-作用曲線は、^3H-サキシトキシン結合低下のそれと一致した。TPAの作用は、PKC阻害薬、さらに、蛋白合成阻害薬により阻止された。TPA存在下では、αサブユニットmRNAの半減期は著しく短縮した。4.Go6976(PKCα、βの選択的阻害薬)、thymeleatoxin(PKCα、β、γの特異的活性薬)を用いて、(1)αサブユニットmRNAの不安定化にはPKCεが、また、(2)細胞表面Naチャネルdown-regulationには、PKCαが関与していることを、明らかにした。

The identification of molecular species and the analysis of intracellular mechanisms of PKC in culture systems and down-regulation of cell membrane Na + production (Heisei 7 Annual Report) of accessory renal cytoplasmic cells (origin of developmental neurons). 1. The presence of PKC, α, ε, and γ in the cytoplasm of the kidney is indicated by the presence of α, ε, and γ in the cytoplasm of the kidney. PKC activity increased rapidly after treatment with TPA and PDBu. 2. The concentration of TPA and PDBu decreased with time, and the B_d of cell surface <max>decreased (K_d did not change). 3. After treatment with TPA and PDBu for 1 time, Na ~(2 +) α ~(2 +) mRNA decreased and reached its lowest value after treatment for 6 time. The concentration-action curve of TPA was consistent with that of TPA. The effects of TPA include PKC inhibition, protein synthesis inhibition, and protein synthesis inhibition. In the presence of TPA, α-mRNA 4. Go6976 (a selective inhibitor of PKCα, β), thymeletoxin (a specific active agent of PKCα, β, γ),(1) PKC α, β, γ mRNA destabilization,(2) PKCα, β, γ down-regulation on cell surface.