培養副腎髄質電位依存性Naチャンネル遺伝子発現の変動と薬物作用の解析

培养肾上腺髓质电压门控Na通道基因表达变化及药物效应分析

• 批准号: 03670114
• 负责人: 和田 明彦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670114/
• 关键词: 副腎髄質細胞; Naチャンネル; ^<22>Na; ^3Hーサキシトキシン; 遺伝子; ヴェラトリジン; テトロドトキシン; αーサソリ毒

1.電位依存性Naチャンネル機能の変動:ヴェラトリジン(Naチャンネル・アクチヴェ-タ-)を含むメディウム中で培養した副腎髄質細胞においては,ヴェラトリジンによる細胞内への ^<22>Naインフルックスが低下した。この低下は,ヴェラトリジン前処置の濃度と期間に依存した。ヴェラトリジンのEC_<50>は約25μMであり,ヴェラトリジン100μM6時間前処置細胞では,t1/2 2ー3時間で対照細胞の約20%まで低下した。ヴェラトリジンとαーサソリ毒の同時投与による最大 ^<22>Naインフルックスも,ヴェラトリジン前処置細胞では対照細胞の1/3ー1/4と低値であった。ヴェラトリジンの低下作用は可逆的で,またテトロドトキシンで拮抗された。ヴェラトリジンの ^<22>Naインフルックスに対するEC_<50>,テトロドトキシンのIC_<50>は,ヴェラトリジン前処置細胞と対照細胞の間で差を認めなかった。2.Naチャンネル蛋白分子の変動:ヴェラトリジン100μMで1時間前処置した細胞では,細胞への ^3Hサキシトキシン結合のBmaxが対照細胞の68%まで減少した(Kdは不変)。3.NaチャンネルmRNAの変動:ラット脳Naチャンネル・タイプIIcDNA1240bpをプロ-ブとして,ウシ副腎髄質ゲノムDNAライブラリ-のサザン・ブロッティングをおこない,ハイブリッドしたDNAフラグメント1340bpをクロ-ン化した。このフラグメントの塩基配列は,ラット脳Naチャンネル・タイプIIとドメインIV,セグメント4ー6を含む637bpの領域で71.7%のホモロジ-を示した(ラット骨格筋,心臓,シビレエイ発電器官とは,62.7,59.5,56.5%のホモロジ-)。この内,ホモロジ-の高い397bpのゲノムDNAを鋳型としてantisense ^<32>PーRNAを合成し,これをプロ-ブとしてmRNAの定量をおこなっている。ヴェラトリジン刺激細胞,環状AMP処理細胞ではmRNAの変動が認められ,さらに現在検討中である。

1. Potential dependency Na チ ャ ン ネ ル function の - move: ヴ ェ ラ ト リ ジ ン (Na チ ャ ン ネ ル · ア ク チ ヴ ェ タ -) contains を む メ デ ィ ウ ム で cultivating し た adrenal marrow stromal cells に お い て は, ヴ ェ ラ ト リ ジ ン に よ る intracellular へ の ^ < 22 > Na イ ン フ ル ッ ク ス が low し た. The に <s:1> is lower than the ヴェラトリジ, and the ヴェラトリジ <s:1> is placed before the <s:1> concentration と. During this period, the に depends on the た. ヴ ェ ラ ト リ ジ ン の EC_ < > 50 は about 25 microns で あ り, ヴ ェ ラ ト リ ジ ン 100 mu M6 time ago 処 place cells で は, t1/2 2 ー 3 time で polices according to cell の about 20% ま で low し た. ヴ ェ ラ ト リ ジ ン と alpha ー サ ソ リ poison の cast and に よ る biggest ^ < 22 > Na イ ン フ ル ッ ク ス も, ヴ ェ ラ ト リ ジ ン 処 before buy cell で は polices according to cell の 1/3 ー 1/4 と low numerical で あ っ た. Youdaoplaceholder0 で The effect of the lower part of the penis is ヴェラトリジ reversible で, and またテトロドトキシ で で antagonizes された. ヴ ェ ラ ト リ ジ ン の ^ < 22 > Na イ ン フ ル ッ ク ス に す seaborne る EC_ < > 50, テ ト ロ ド ト キ シ ン の IC_ < > 50 は, ヴ ェ ラ ト リ ジ ン 処 before buy cell と polices according to poor で を recognition between cell の め な か っ た. 2. Na チ ャ ン ネ ル protein molecule の - move: ヴ ェ ラ ト リ ジ ン 100 microns で 処 before 1 time buy し た cells で は, cell へ の ^ 3 h サ キ シ ト キ シ ン combining の Bmax が polices according to cell の 68% ま で reduce し た (Kd は variations). 3. Na チ ャ ン ネ ル mRNA の - move: ラ ッ ト 脳 Na チ ャ ン ネ ル · タ イ プ IIcDNA1240bp を プ ロ - ブ と し て, ウ シ adrenal mass marrow ゲ ノ ム DNA ラ イ ブ ラ リ - の サ ザ ン · ブ ロ ッ テ ィ ン グ を お こ な い, ハ イ ブ リ ッ ド し た DNA フ ラ グ メ ン ト 1340 bp を ク ロ ン to し た . こ の フ ラ グ メ ン ト の match column は salt base, ラ ッ ト 脳 Na チ ャ ン ネ ル · タ イ プ II と ド メ イ ン IV, セ グ メ ン ト contains 4 ー 6 を む 637 bp の field で 71.7% の ホ モ ロ ジ - を shown し た (ラ ッ ト skeletal muscle, heart is crucial, シ ビ レ エ イ 発 electric organs と は, 62.7, 59.5, 56.5% の ホ モ ロ ジ -) . Within こ の ホ モ ロ ジ - high の い 397 bp の ゲ ノ ム DNA を type where と し て antisense ^ < > 32 P し を ー RNA synthesis, こ れ を プ ロ - ブ と し て mRNA の quantitative を お こ な っ て い る. Youdaoplaceholder0 <s:1> stimulate cells, circular amP-treated cells で で mRNA <s:1> changes が recognize められ,さらに now 検 seek である.