培養副腎髄質電位依存性Naチャンネル遺伝子発現の変動と薬物作用の解析

培养肾上腺髓质电压门控Na通道基因表达变化及药物效应分析

• 批准号: 03670114
• 负责人: 和田 明彦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: University of Occupational and Environmental Health, Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670114/
• 关键词: 副腎髄質細胞; Naチャンネル; ^<22>Na; ^3Hーサキシトキシン; 遺伝子; ヴェラトリジン; テトロドトキシン; αーサソリ毒

1.電位依存性Naチャンネル機能の変動:ヴェラトリジン(Naチャンネル・アクチヴェ-タ-)を含むメディウム中で培養した副腎髄質細胞においては,ヴェラトリジンによる細胞内への ^<22>Naインフルックスが低下した。この低下は,ヴェラトリジン前処置の濃度と期間に依存した。ヴェラトリジンのEC_<50>は約25μMであり,ヴェラトリジン100μM6時間前処置細胞では,t1/2 2ー3時間で対照細胞の約20%まで低下した。ヴェラトリジンとαーサソリ毒の同時投与による最大 ^<22>Naインフルックスも,ヴェラトリジン前処置細胞では対照細胞の1/3ー1/4と低値であった。ヴェラトリジンの低下作用は可逆的で,またテトロドトキシンで拮抗された。ヴェラトリジンの ^<22>Naインフルックスに対するEC_<50>,テトロドトキシンのIC_<50>は,ヴェラトリジン前処置細胞と対照細胞の間で差を認めなかった。2.Naチャンネル蛋白分子の変動:ヴェラトリジン100μMで1時間前処置した細胞では,細胞への ^3Hサキシトキシン結合のBmaxが対照細胞の68%まで減少した(Kdは不変)。3.NaチャンネルmRNAの変動:ラット脳Naチャンネル・タイプIIcDNA1240bpをプロ-ブとして,ウシ副腎髄質ゲノムDNAライブラリ-のサザン・ブロッティングをおこない,ハイブリッドしたDNAフラグメント1340bpをクロ-ン化した。このフラグメントの塩基配列は,ラット脳Naチャンネル・タイプIIとドメインIV,セグメント4ー6を含む637bpの領域で71.7%のホモロジ-を示した(ラット骨格筋,心臓,シビレエイ発電器官とは,62.7,59.5,56.5%のホモロジ-)。この内,ホモロジ-の高い397bpのゲノムDNAを鋳型としてantisense ^<32>PーRNAを合成し,これをプロ-ブとしてmRNAの定量をおこなっている。ヴェラトリジン刺激細胞,環状AMP処理細胞ではmRNAの変動が認められ,さらに現在検討中である。

1. Potential-dependent changes in the function of <22>Na The concentration and duration of the treatment before the treatment are dependent on the concentration. The EC_<50>of was about 25μM, and the cells treated with 100μ M 6 hours ago were about 20% lower than the control cells at t1/2 2 - 3 hours. The <22>maximum number of cells treated before treatment is 1/3 of the number of cells treated before treatment. The effect of the decrease in the concentration of the drug is reversible, and the drug is antagonistic. The <22>EC_<50>, IC_, IC_<50>, 2. The activity of Na ~+ protein molecules: When the cells were treated with 100μM for 1 hour, the Bmax of cell binding decreased by 68%(Kd did not change). 3. The expression of DNA gene mRNA: DNA gene expression 1240bp, para-kidney DNA gene expression 1340bp, para-kidney DNA gene expression 1340bp. 71.7% of the 637bp domain was identified by the base alignment of the matrix (62.7%, 59.5%, 56.5%). In this case, the DNA sequence of the 397bp <32>DNA fragment was amplified by PCR, and the mRNA sequence was amplified by PCR. The cells were stimulated by cyclic AMP, and the mRNA was changed in the cells.