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CカイネースによるNaチャネル発現の制御と細胞応答の修飾

C-激酶对 Na 通道表达的调节和细胞反应的改变

基本信息

批准号：
07670114
负责人：
和田明彦
金额：
$ 1.22万
依托单位：
宮崎医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07670114/
关键词：
Sodium channel Protein kinase C Down-regulation Western blot Northern blot Binding ^<22>Na+ influx Gene expression

项目摘要

ウシ副腎髄質細胞(発生学時に神経堤に由来し、交感神経節と相同)の培養系において、プロテイン・カイネースCが細胞膜Naチャネル発現とその薬理学的性質を、どのように変動させるか検討した。1.プロテイン・カイネースC活性薬TPA、PDBuで細胞を処理すると、濃度依存的(lC_<50> 19nM)、時間依存的(T1/2 4.5h)に、^3H-サキシトキシン結合のB_<max>が減少した(K_dは不変)。生物学的活性を示さない4α-TPAは効果がなく、また、TPAの作用はプロテイン・カイネースC阻害薬H-7、アクチノマイシンD、サイクロヘキサマイドなどの遺伝子転写、翻訳阻害薬により消失した。2.ウエスタン・ブロットにおいて、TPA(100nM)、PDBu(100nM)で15h処理した際には、α-、ε-サブタイプは細胞質より膜分画ヘ移行した(ζ-サブダイプは移行しない)。TPA処理細胞では、Naチャネル活性薬ヴェラトリジンの細胞内への^<22>Na+流入の濃度-作用曲線は下方に移動した(EC_<50>は不変)。また、ヴェラトリジンの^<22>Na^+流入は、対照細胞と同程度、ブレベトキシンによってアロステリックに増強された。ノーザン・ブロットにより、ウシ副腎髄質細胞mRNAは、ラット脳タイプII、II^ANaチャネルcDNAプローブとは、ハイブリダイズしなかった。心臓、骨格筋のNaチャネル間で相同性の高い領域を選び、RT-PCRによりプローブを得たが、これともハイブリダイズしなかった。ヒト神経内分泌細胞型NaチャネルcDNAプローブ(1.5Kb、2.2Kb)では、9.5Kbにバンドが検出された。以上、(1)副腎髄質細胞Naチャネルは、分子構造の点で、神経内分泌型Naチャネルに類似していること、(2)α-、ε-サブタイプのプロテイン・カイネースC活性化によりdown-regulationされるが、その薬理学的性質は変化しないこと、(3)down-regulationには、蛋白質のde novo合成が関与していることを、明らかにした。

The culture system of accessory renal cytoplasmic cells (with the same origin of nervous system and sympathetic nervous system during development) was studied in detail. 1. The activity of TPA and PDBu in cell culture was decreased in a concentration-dependent manner (<50>19nM) and a time-dependent manner (T1/2 4.5h<max>). Biological activity shows that 4α-TPA has the effect of inhibiting H-7, inhibiting H-7, inhibiting T-7, T-7 2. When treated with TPA(100nM), PDBu(100 nM) for 15h, α-, ε- The <22>concentration-action curve of Na+ influx in TPA-treated cells shifted downward (EC<50>_r). In addition, the <22>Na^+ influx into the cells was increased to the same extent as in the control group.ノーザン·ブロットにより、ウシ副肾髄质细胞mRNAは、ラット脳タイプII、II^ANaチャネルcDNAプローブとは、ハイブリダイズしなかった。The heart, the bone, the muscle, the high quality, the high quality, the The neuroendocrine cell type NaCl2 cDNA fragments (1.5Kb, 2.2Kb) were found in the DNA fragments (9.5Kb). The above,(1) pararenal cytoplasmic cell Na + production, molecular structure point, neuroendocrine Na + production similar,(2)α-, ε-