ピルビン酸キナーゼアイソザイム遺伝子の転写とスプライシングを制御する因子

控制丙酮酸激酶同工酶基因转录和剪接的因素

基本信息

批准号：
08670142
负责人：
野口民夫
金额：
$ 1.15万
依托单位：
福井医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670142/
关键词：
ピルビン酸キナーゼ遺伝子 NF1ファミリー HNF4 選択的スプライシング

项目摘要

1. ピルビン酸キナーゼ(PK)L遺伝子の炭水化物応答性転写制御領域を構成するLIIにHNF4とNF1ファミリー(NF1LとNF1/Red1)が結合するが,これらはLIIの重複する配列に結合することにより拮抗的に作用することを見いだした.すなわち,HNF4は転写活性を上げるのに対し,NF1LやNF1/Red1はHNF4の作用を抑制する.また,NF1ファミリーはS14遺伝子の炭水化物応答性領域のアクセサリー部位に結合するが,HNF4は結合しないことも明らかにした.したがって,NF1ファミリーはこれらの遺伝子の炭水化物応答性に対する補助因子として機能する可能性が考えられる.2. PKL遺伝子の転写制御領域のLIIIに作用する転写因子として,ホメオボックスタンパク質のHEXを酵母での遺伝的選択法を使って同定したが,大腸菌で発現させたHEXはLIIIには結合しなかった.しかし,LIIに結合するHNF4やLIに結合するHNF1の活性を上昇させることが見いだされた.HEXはこれらの領域に直接に結合しないので,タンパク質間相互作用によりHNF4やHNF1の活性に影響を与えているものと考えられる.3. PKM遺伝子転写産物の選択的スプライシングに関与するシスエレメントの同定を行った.その結果,肝癌細胞でのエキソン9の除去とエキソン10の選択に関与するエレメントがエキソン9の3′側とイントロン9の5′側の領域かエキソン10とイントロン10の相当する領域に存在することを示した.4. PKM遺伝子の転写制御領域のC領域に結合する転写因子のクローニングを酵母での遺伝的選択法を使って試みているが,まだ成功していない.

1。我们发现HNF4和NF1家族（NF1L和NF1/RED1）与LII结合，LII构成了丙酮酸激酶（PK）L基因的碳水化合物反应性转录调节区域，但这些基因通过与LII的重叠序列结合而起作用。也就是说，HNF4增加了转录活性，而NF1L和NF1/RED1抑制了HNF4的作用。我们还透露，NF1家族与S14基因的碳水化合物反应区域中的辅助位点结合，但HNF4没有。因此，NF1家族可能可以充当这些基因碳水化合物反应性的辅因子2。 Hex是一种同源蛋白，使用酵母中的遗传选择方法，将作用于PKL基因的转录调节区域的转录因子，但在大肠杆菌中表达的HEX与LIII没有结合。但是，发现它增加了与LII和HNF1结合的HNF4的活性，该活性与LII结合。由于HEX与这些区域没有直接结合，因此人们认为蛋白质 - 蛋白质相互作用会影响HNF4和HNF1.3的活性。我们确定了参与PKM基因转录本的替代剪接的顺式元素。我们表明，与外显子瘤细胞中外显子9的去除和外显子10的选择有关的元素存在于外显子9的3'侧以及内含子9的5'侧或外显子10和内含子10.4的相应区域。我们试图使用酵母中的遗传选择方法来克隆与PKM基因转录调节区域结合的转录因子，但尚未成功。