肝臓の発生と分化におけるホメオボックスタンパク質Hexの役割

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1.Hex遺伝子のコンディショナルノックアウトマウスの作製。分化した成熟肝細胞におけるHexの役割を明らかにするために、Cre/loxPシステムを利用したHexのコンディショナルノックアウトマウスの作製を行っている。ターゲティングベクターと相同組み換えを起こした3種類のESクローンを得ており、このうち1種類のES細胞からキメラマウスを得た。現在、F1マウスを作製中である。2.ドミナントネガティブHexを用いた解析。Hexは転写の活性化と抑制の両方に作用するが、転写活性化に関与する領域がホメオドメインよりもC末側にあることを見いだした。このC末側を除いたミュータントはHexによる転写活性化に対しドミナントネガティブミュータントとして作用すること示した。アデノウイルスをベクターとしてこのミュータントを肝細胞に発現させ、その影響を調べた。その結果、Hexによって正に制御されることが知られているNa依存性胆汁酸共輸送体遺伝子の発現が抑制されることが判明した。更にマイクロアレイで網羅的に解析したところ、20種類以上の遺伝子の発現が影響を受けることが示唆された。3.肝発生におけるFGFとHexの関係。FGFは内胚葉からの肝細胞の発生を促す細胞外シグナルであるが、その標的となる細胞内因子は知られていない。そこで、内胚葉の培養系を用いて、FGFのHex遺伝子の発現に及ぼす影響を検討した。その結果、FGFは直接にはHex遺伝子の発現を制御しないことが判明した。