プロセシングの違いによるピルビン酸キナーゼアイソザイムのmRNAの生成とその調節

丙酮酸激酶同工酶 mRNA 的产生及其加工差异引起的调控

• 批准号: 61570124
• 负责人: 野口 民夫
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570124/
• 关键词: ピルビン酸キナーゼアイソザイム; ピルビン酸キナーゼ遺伝子; RNAプロセシング

高等動物のピルビン酸キナーゼ(PK)はL型、R型、【M_1】型、【M_2】型の4種のアイソザイムが存在し、組織特異的に発現している。これらのうち、LとR型、【M_1】と【M_2】型のmRNAはそれぞれ同じ遺伝子(L遺伝子とM遺伝子)から転写され、プロセシングの違いなどにより組織特異的に生成されるものと考えられている。このことを実証するため、これまで【M_1】型と【M_2】型のcDNAやM遺伝子のクローンを単離してその構造を解析し、【M_1】と【M_2】型のmRNAは3'端側の翻訳配列が160塩基程異なる以外は同一の配列を有すること、及び両型に固有の配列はM遺伝子中にそれぞれ1個のエクソンとして隣接して存在することを明らかにした。今年度はM遺伝子の全構造を解明するために、単離したクローンの塩基配列を調べ、5'非翻訳部分を除し全エクソン/イントロン構造を明らかにした。5'非翻訳配列は単離してある遺伝子のクローン中には存在しなかったので、現在、他のライブラリーから検索中である。次に、【M_1】型に固有のcDNA部分をプローブとして、【M_2】型しか発現していないAH130肝癌細胞の核RNAをノーザン分析した結果、成熟型よりも大きなRNA種に放射活性が検出された。【M_1】型と【M_2】型mRNAの5'端が同一であることを考えると、これらの結果は両mRNAが同一転写産物のスプライシングの違いで生じることを強く示唆する。一方、L型とR型についてはL型とcDNAの配列をすでに明らかにしていたので、R型のcDNAをクローン化し、さらにL遺伝子のクローンを単離して、その塩基配列を調べた。その結果、R型とL型のmRNAは翻訳配列を含む5'端の配列のみが異なること、これらの固有の配列はそれぞれ1個のエクソンとしてL遺伝子に存在しており、両mRNAは転写開始点の違いで産生されることが明らかになった。

In higher animals, there are four types of PK: L type, R type,[M_1] type and [M_2] type. The mRNA of L, R, M1 and M2 types were expressed in different tissues. The structural analysis of cDNA and M gene pairs of [M_1] and [M_2] types shows that there is one adjacent gene in the cDNA and M gene pairs of [M_1] and [M_2] types that are different from each other except for the 160-nucleotide sequence at the 3'end. This year, the entire structure of the M element is clarified, the separation of the base is adjusted, and the 5'non-inverted part is removed. 5'Non-inverted array is separated from each other, and there is no such thing as an existing one. The results of nuclear RNA analysis of AH130 hepatoma cells were as follows: [M_1]-type cDNA fragments were detected,[M_2]-type cDNA fragments were detected, and mature RNA fragments were detected. The 5'terminal of [M_1]-type mRNA and [M_2]-type mRNA are identical, and the result is that the 5' terminal of [M_1]-type mRNA and [M_2]-type mRNA are identical, and the 5 'terminal of [M_1]-type mRNA and [M_2]-type mRNA are identical. The alignment of L-type cDNA and R-type cDNA is clearly defined, and the alignment of L-type cDNA and R-type cDNA is clearly defined. As a result, the mRNA of R and L types are aligned in reverse direction, including the 5'end of the mRNA. The mRNA of R and L types are aligned in reverse direction. The mRNA of R and L types are aligned in reverse direction.