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L型ピルビン酸キナーゼ遺伝子のエンハンサーユニットに結合する転写因子の構造と機能

L型丙酮酸激酶基因增强子结合转录因子的结构和功能

基本信息

批准号：
06670140
负责人：
野口民夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670140/
关键词：
L型ピルビン酸キナーゼ転写因子 NF1ファミリー HNF4

项目摘要

本研究はL型ピルビン酸キナーゼ(LPK)遺伝子の肝細胞特異的転写の制御機構や食餌性炭水化物による転写の制御機構を解明することを目的とし、エンハンサーユニットのLIIとLIIIに結合する転写因子の同定を行った。1、LII結合タンパク質は熱安定性の異なる少なくとも2種類のタンパク質が存在したので、熱に安定なタンパク質をラット肝の核抽出液から精製し、そのペプチド断片のアミノ酸配列を解析した。その結果、NF1ファミリーに属するハムスターのNF1/Res1と非常に高い相同性があることが判明した。NF1の抗体を用いてバンドシフト法で解析したところ、核抽出液中のLIIに結合する熱安定性のタンパク質はこの抗体と反応することが認められた。一方、熱に不安定なタンパク質は抗体を用いた実験からHNF4であることが証明された。HNF4は肝癌細胞で発現させた時、LII活性を著明に促進したが、NF1についてはNF1ファミリーに属するNF1Lを発現させたところ、約2倍の活性促進が認められた。2、LIIIに結合する核タンパク質は酵母を用いてクローニングを行った。すなわち、酵母の発現ベクターを用いてcDNAライブラリーを作成し、これをHIS遺伝子の上流にタンデムにLIIIを結合したレポーターをもつhis-の酵母にトランスフェクトし、his+の酵母を選択することにより行った。その結果、2個のクローンが得られた。これらの塩基配列を解析したところ、2個のクローンは同じ配列を有するがポリAの付加部位が異なることが判明した。オープンリーディングフレームから導きだしたアミノ酸配列はマウスのHEXと呼ばれるホメオドメインをもつタンパク質と97%の相同性を有していた。

The present study is aimed at clarifying the regulatory mechanism of hepatocyte specific transcription of LPK gene and the regulatory mechanism of LII and LIII binding of LPK gene. 1. LII binding substance is different in thermal stability. 2 kinds of LII binding substance exist. 2 kinds of LII binding substance are different in thermal stability. 3 kinds of LII binding substance are different in thermal stability. 4 kinds of LII binding substance are different in thermal stability. NF1/Res1 is very similar. NF1 antibodies were analyzed by the method of molecular biology, and LII binding in nuclear extracts was analyzed by the method of molecular biology. A party, heat instability, quality, anti-virus, anti-virus When HNF4 was detected in liver cancer cells, LII activity was significantly increased, while NF1 activity was increased by about 2 times. 2. LIII is a combination of nuclear and yeast. The expression of the yeast gene was determined by cDNA sequencing. The expression of the yeast gene was determined by LIII sequencing. The result is that two of them have been found. The two groups are arranged in the same way. The similarity between the two groups is 97%.