L型ピルビン酸キナーゼ遺伝子のエンハンサーユニットに結合する転写因子の構造と機能

L型丙酮酸激酶基因增强子结合转录因子的结构和功能

• 批准号: 06670140
• 负责人: 野口 民夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670140/
• 关键词: L型ピルビン酸キナーゼ; 転写因子; NF1ファミリー; HNF4

本研究はL型ピルビン酸キナーゼ(LPK)遺伝子の肝細胞特異的転写の制御機構や食餌性炭水化物による転写の制御機構を解明することを目的とし、エンハンサーユニットのLIIとLIIIに結合する転写因子の同定を行った。1、LII結合タンパク質は熱安定性の異なる少なくとも2種類のタンパク質が存在したので、熱に安定なタンパク質をラット肝の核抽出液から精製し、そのペプチド断片のアミノ酸配列を解析した。その結果、NF1ファミリーに属するハムスターのNF1/Res1と非常に高い相同性があることが判明した。NF1の抗体を用いてバンドシフト法で解析したところ、核抽出液中のLIIに結合する熱安定性のタンパク質はこの抗体と反応することが認められた。一方、熱に不安定なタンパク質は抗体を用いた実験からHNF4であることが証明された。HNF4は肝癌細胞で発現させた時、LII活性を著明に促進したが、NF1についてはNF1ファミリーに属するNF1Lを発現させたところ、約2倍の活性促進が認められた。2、LIIIに結合する核タンパク質は酵母を用いてクローニングを行った。すなわち、酵母の発現ベクターを用いてcDNAライブラリーを作成し、これをHIS遺伝子の上流にタンデムにLIIIを結合したレポーターをもつhis-の酵母にトランスフェクトし、his+の酵母を選択することにより行った。その結果、2個のクローンが得られた。これらの塩基配列を解析したところ、2個のクローンは同じ配列を有するがポリAの付加部位が異なることが判明した。オープンリーディングフレームから導きだしたアミノ酸配列はマウスのHEXと呼ばれるホメオドメインをもつタンパク質と97%の相同性を有していた。

This study は L ピ ル ビ ン acid キ ナ ー ゼ (LPK) posthumous son 伝 の liver cell system of specific planning write の royal institution や continuous sexual carbon hydrates に よ る planning system of writing の imperial institutions を interpret す る こ と を purpose と し, エ ン ハ ン サ ー ユ ニ ッ ト の LII と LIII に combining す る planning write factor の with fixed line を っ た. 1, as well as the combination of LII タ ン パ ク qualitative は thermal stability の different な る less な く と も 2 kinds の タ ン パ ク qualitative が exist し た の で, hot に stable な タ ン パ ク qualitative を ラ ッ ト liver の nuclear extract か ら refined し, そ の ペ プ チ ド fragment の ア ミ ノ acid with column を parsing し た. そ の results and NF1 フ ァ ミ リ ー に genus す る ハ ム ス タ ー の NF1 / Res1 と に い very high identity が あ る こ と が.at し た. NF1 を の antibody with い て バ ン ド シ フ ト method で し た と こ ろ, nuclear extract の LII に combining す る thermal stability の タ ン パ ク qualitative は こ と の antibodies against 応 す る こ と が recognize め ら れ た. Party, thermal に unrest な タ ン パ ク qualitative は antibody を with い た be 験 か ら HNF4 で あ る こ と が prove さ れ た. HNF4 は liver cancer cells で 発 now さ せ た active を zhao Ming, LII に promote し た が, NF1 に つ い て は NF1 フ ァ ミ リ ー に genus す る NF1L を 発 now さ せ た と こ ろ, about 2 times の activity to promote が め ら れ た. 2, LIII に combining す る nuclear タ ン パ ク qualitative は yeast を with い て ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. す な わ ち, yeast の 発 now ベ ク タ ー を with い て cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を し, consummate こ れ を HIS posthumous son 伝 の upper に タ ン デ ム に LIII を combining し た レ ポ ー タ ー を も つ ihs - の yeast に ト ラ ン ス フ ェ ク ト し, ihs + の yeast を sentaku す る こ と に よ り line っ た. Youdaoplaceholder0 result, 2 そ ロ ロ が が が られた we get られた. こ れ ら の salt base with column を parsing し た と こ ろ, 2 の ク ロ ー ン は with じ match column を す る が ポ リ の pay plus A parts が different な る こ と が.at し た. オ ー プ ン リ ー デ ィ ン グ フ レ ー ム か ら guide き だ し た ア ミ ノ acid with column は マ ウ ス の HEX と shout ば れ る ホ メ オ ド メ イ ン を も つ タ ン パ ク qualitative と 97% gay を の phase with し て い た.

项目成果

Ziyuan Wang: "Transcriptional regulatory regions for expression of the rat pyruvate kinase M gene" European Journal of Biochemistry. 220. 301-307 (1994)

Ziyuan Wang：“大鼠丙酮酸激酶M基因表达的转录调控区域”欧洲生物化学杂志。