CD38ノックアウトマウスによるサイクリックADPリボースの膵β細胞機能の解明

使用 CD38 敲除小鼠阐明胰腺 β 细胞中环状 ADP 核糖的功能

• 批准号: 08670161
• 负责人: 加藤 一郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670161/
• 关键词: ノックアウトマウス; CD38; サイクリックADPリボース; セカンドメッセンジャー; インスリン; 膵β細胞; グルコース

申請者らはこれまで、NADの代謝産物である「サイクリックADPリボース」が、膵β細胞の細胞内セカンドメッセンジャーとしてインスリン分泌を司ることを明らかにしてきた。最近、CD38蛋白が、サイクリックADPリボースを合成・分解する酵素活性を持つことから、CD38が、細胞内サイクリックADPリボース量を制御することにより膵β細胞内Ca^<2+>濃度を制御し、インスリン分泌・合成能を制御する可能性が示唆されてきた。膵β細胞におけるCD38蛋白の機能を明らかにするため、遺伝子標的法を用いてマウスCD38遺伝子をノックアウトしたマウスを作製することを目的として、以下のとおり実験が進行した。(1)マウスCD38遺伝子のエキソン1を含む15Kbのゲノム遺伝子断片を単離し、その構造を決定した。(2)上記の遺伝子断片を用いて、CD38遺伝子ノックアウト用ベクターを作製した。(3)ベクターをES細胞に導入し、サザンブロット法により、相同組換を起こした変位ES細胞株を分離した。(4)相同組換えを起こしたES細胞をマウス受精卵に顕微注入してキメラマウスを得た。(5)得られたキメラマウスを普通のマウスと交配し変異遺伝子のgerm-line transmissionを確認した。(6)CD38遺伝子のエキソン1をヘテロに欠失するマウスどうしを交配にかけた。

Applicants ら は こ れ ま で, NAD の metabolites で あ る "サ イ ク リ ッ ク ADP リ ボ ー ス" の が, Cui beta cells within セ カ ン ド メ ッ セ ン ジ ャ ー と し て イ ン ス リ ン secretion を department る こ と を Ming ら か に し て き た. Recently, CD38 protein が, サ イ ク リ ッ ク ADP リ ボ ー ス を synthesis, decomposition す る enzyme activity を hold つ こ と か ら, CD38 が, intracellular サ イ ク リ ッ ク ADP リ ボ ー ス quantity を suppression す る こ と に よ り Cui beta cells Ca ^ > < 2 + concentration を royal し, イ ン ス リ ン can secrete, synthetic を suppression す が る possibility in stopping さ れ Youdaoplaceholder0 た た. Cui beta cells に お け る の CD38 protein function を Ming ら か に す る た め, heritage 伝 を son mark method with い て マ ウ ス CD38 posthumous son 伝 を ノ ッ ク ア ウ ト し た マ ウ ス を cropping す る こ と を purpose と し て, the following の と お り be 験 が for し た. (1) マ ウ ス CD38 posthumous son 伝 の エ キ ソ ン 1 contains を む 15 KB の ゲ ノ ム heritage 伝 son fragment を 単 し, そ の tectonic を decided し た. (2) written の posthumous son 伝 を fragment with い て, CD38 but 伝 ノ ッ ク ア ウ ト with ベ ク タ ー を cropping し た. (3) ベ ク タ ー を に import し ES cells, サ ザ ン ブ ロ ッ ト method に よ り, the same group in を こ し た - an ES cell lines を separation し た. (4) In the same group, えを are used to collect <s:1> たES cells を ウス ウス fertilized eggs に顕, which are then microinjected into <s:1> てキメラ ウスを ウスを to obtain た. (5) ら れ た キ メ ラ マ ウ ス を ordinary の マ ウ ス と mating し - different heritage 伝 son の germ - line transmission を confirm し た. (6) CD38 posthumous son 伝 の エ キ ソ ン 1 を ヘ テ ロ に owe lost す る マ ウ ス ど う し を mating に か け た.

项目成果

野口直哉: "膵β細胞のcyclic ADP-ribose感受性Ca2+チャンネルからのCa2+放出機構: FK506結合タンパク質の関与" 糖尿病. 40 (in press). (1997)

Naoya Noguchi：“胰腺 β 细胞中环状 ADP 核糖敏感 Ca2+ 通道的 Ca2+ 释放机制：FK506 结合蛋白的参与”糖尿病 40（出版中）。

Kikuchi, Y.: "Transgenic Copper/Zinc-Superoxide Dismutase Ameliorates Caerulein-Induced Pancreatitis in Mices" Biochem. Biophys. Res. Commun.(in press). (1997)

Kikuchi, Y.：“转基因铜/锌超氧化物歧化酶改善小鼠中雨蛙素诱导的胰腺炎”生物化学。

那谷耕司: "マウスReg I遺伝子を過剰発現する膵β細胞の増殖能:トランスジェニックマウスを用いた解析" 糖尿病. 40(in press). (1997)

Koji Natani：“过度表达小鼠 Reg I 基因的胰腺 β 细胞的增殖能力：使用转基因小鼠进行分析”糖尿病 40（出版中）。

池端史子: "糖尿病患者における抗CD38(cyclic ADP-ribose合成・分解酵素)自己抗体の存在"糖尿病. 39. 183-183 (1996)

Fumiko Ikebata：“糖尿病患者中存在抗 CD38（环状 ADP-核糖合成/降解酶）自身抗体”糖尿病。 39. 183-183 (1996)

Kato, I.: "Enhancement of glucose-induced insulin secretion in transgenic mice overexpressing human VIP gene in pancreatic β-cells." Ann. New York Acad. Sci.805. 232-243 (1996)

Kato, I.：“在胰腺 β 细胞中过度表达人 VIP 基因的转基因小鼠中葡萄糖诱导的胰岛素分泌的增强”，Ann 纽约科学 232-243。