コンディショナル・ジーンノックイン法によるヒト急性骨髄性白血病モデルマウスの樹立

条件基因敲入法建立人急性髓系白血病小鼠模型

• 批准号: 10151254
• 负责人: 美野輪 治
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10151254/
• 关键词: AML1; 急性骨髄性白血病; 染色体転座; 融合遺伝子; MTG8; EVl1; コンディショル・ジーンノックイン法

AML1伝子内で組換えが起こり,その結果融合遺伝子が生成する様な染色体転座がヒト急性骨髄性白血病AMLで高率に認められる。この染色体異常は,t(8;21)であり、慢性骨髄性白血病でもt(3;21)の転座が見られる。これらの転座により生じる、融合遺伝子に由来するAML1-MTG8及びAML1-EVI1キメラ遺伝子産物が造血幹細胞の癌化を引き起こす事により白血病が発症すると考えられるが、キメラ遺伝子産物の生体での機能はよく理解されてはいない。そこで、ヒト急性骨髄性白血病の発症状況に忠実に従い、AML1-MTG8及びAML1-EVI1キメラ遺伝子産物を、成体まで成長したマウスで、骨髄造血幹細胞のみに特異的に発現させるための世界的に全く前例を見ないコンデイショル・ジーンノックイン法を新たに開発し、これにより、ヒト急性骨髄性白血病モデルマウスを樹立する事を試みた。平成9年度までに我々は、AML1-MTG8及びAML1-EVI1コンデイショナル・ジーンノックインベクターを作製し、これをES細胞に導入して、ES細胞内でCre酵素による遺伝子変換(回転)が起きる事を確認した。更に,このES細胞からコンデイショナル・ジーンノックインalleleを持つマウスを作成した。平成10年度は、このコンデイショナル・ジーンノックインマウスを用いて、以下の結果を得た。1.骨髄造血幹細胞HPSの分離とCreによる遺伝子組み換えの確認:FAXによりSca-1+/c-kit+を指標としてコンデイショナル・ジーンノックインalleleを持っHPSを単離した。更に,HPSにadenovirus vectorを用いて遺伝子変換を誘導し、PCR-サザン法で遺伝子変換を確認した。現在骨髄造血幹細胞におけるキメラ蛋白の発現の確認を行っている。2.HPSに対するadenovinrus vectorの感染性が低いと考えられたので,遺伝子変換(回転)を誘導するためのCreの発現を,トランスジェニックマウス(CAG-Cre)とのかけ合わせによる方法を試みている。

AML1 has a high rate of acute myeloid leukemia and a high rate of recognition of acute bone marrow leukemia. Chromosomal abnormality, t(8;21), chronic bone marrow leukemia, t(3;21), 転seat, が见られる. Hematopoietic stem cells produced by これらの転区により生じる, fused legacy legacy product するAML1-MTG8 and びAML1-EVI1 legacy legacy product The cause of cancer , キメラ缝子 Product の生での Function はよくUnderstanding されてはいない.そこで, ヒト acute bone marrow leukemia and の発 syndrome status に正実に従い, AML1-MTG8 and びAML 1-EVI1 キメラ弝子product を, adult growth したマウスで, bone marrow hematopoietic stem cell のみに特The original example of the different world of the new world is the same as that of the new world.を新たに开発し、これにより、ヒト acute bone marrow leukemia モデルマウスをEstablishment する事をtrial みた. In 2009, the までに我々は, AML1-MTG8 and びAML1-EVI1コンデイショナル・ジーンノックインベクターをProduction, ES cell introduction, Cre enzyme in ES cells, replacement (return), confirmation. Updated, このES cell からコンデイショナル・ジーンノックインalleleをhold つマウスを成した. Heisei 10 year は、このコンデイショナル・ジーンノックインマウスを用いて、The following results are obtained. 1. Confirmation of the isolation and replacement of bone marrow hematopoietic stem cells HPS by Cre sterile subgroup: FAX によりSca-1+/ c-kit+をIndicatorとしてコンデイショナル・ジーンノックインalleleをholdっHPSを単利した. More recently, the HPS adenovirus vector has been used for induction, and the PCR-サザン method has been used for confirmation. Now the bone marrow hematopoietic stem cells are confirmed and confirmed. 2.HPSに対するadenovinrus The vector's infectivity is low, the test is low, and the remaining vector is changed (return) to induce the Cre.発appearを,トランスジェニックマウス(CAG-Cre)とのかけ合わせによる法をtrialみている.

项目成果

H.Okada, T.Noda et al.: "The AML1(-/-)embryos do not express a set of hematopoiesis-related gene transcripts including that of PU.1" Oncogene. 17. 2287-2293 (1998)

H.Okada、T.Noda 等人：“AML1(-/-) 胚胎不表达一组造血相关基因转录本，包括 PU.1 的转录本”癌基因。

T.Manabe, T.Noda et al.: "Separation of killing and tumorigenic effects of an alkylating agent in mice defective in two of the DNA repair genes" Nature. 384. 577-581 (1998)

T.Manabe、T.Noda 等人：“烷化剂对两个 DNA 修复基因缺陷的小鼠的杀伤作用和致瘤作用的分离”《自然》杂志。