P1ファージ由来組換え酵素導入による条件依存性変異体マウスの作成

通过引入源自 P1 噬菌体的重组酶来创建条件依赖性突变小鼠

• 批准号: 06680839
• 负责人: 美野輪 治
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06680839/
• 关键词: 標的組換え; LoxP; Cre酵素; P1ファジ-; 条件依存性変異; ES再細胞

標的遺伝子組換え法は、ある特定の遺伝子の機能についてin vivoの解析を可能にする有力な方法である。一方多くの遺伝子は、生体の発生・分化の各段階において多様な役割を担っていると考えられ、従来の標的組換え法のみでは、変異体が異常をきたす段階以降については、その解析が不可能である。そこで、標的遺伝子組換え法の応用範囲を拡張し、解析可能なマウスの発生・分化の段階を拡大するために、条件依存性の標的組換え法の開発が必須である。(1)対象遺伝子の検討 まずこの方法対象となる遺伝子の検討を行った。我々の研究室で、従来の標的組換え法により既に変異の生殖細胞系列への寄与が確認されているIP3受容体(IP3R),HGF/SF,APCの3種の遺伝子を選んだ。IP3R変異体に関しては、詳細な表現型の解析を現在続行中である。HGF/SFについては、そのホモ接合変異体が、胎生期に胎盤の形成不全のために致死である事を明らかにした。従って、これ以降の発生におけるHGFの機能を明らかにするためには、条件依存性変異体の作製が有効である。またAPC遺伝子については、そのホモ接合変異体が、発生のごく初期、即ち原腸陥入以前に既に致死である事が明らかとなり、同様に条件依存性変異の導入が必須である。(2)APCへの応用 まず条件依存性標的組換え法をAPC遺伝子に応用するためにES細胞中での組換え酵素の発現とその効果の検討を行った。APC遺伝子の第14エクソンの上流及び下流の2ヶ所にLoxP配列が挿入した組換えベクターを作製し、これをES細胞に導入して潜在的変異を持つES細胞を得た。ES細胞の中で実際にCre酵素によるLoxP配列の組換えが起こる事を確認するためにCre酵素の発現ベクターを、この潜在的変異を持つES細胞に導入した。PCR法及びサザンブロット法により、APC遺伝子上で目的とするCre酵素による組換えが起きている事を確認した。これらの潜在的変異ES細胞とCre酵素による組換え変異ES細胞両者から、現在ブラストシスト注入法でマウスを作成している。

The target is the combination of the target and the method. The specific function is the function of the body and the analysis is possible. One side is many, the remaining body is the child, and the living body is born and differentiated at each stage. The target combination is the method of changing the method, the abnormality of the variant body is the abnormality, and the stage is down, and the analysis is impossible.そこで、Target legacy sub-combination method の応 use fan 囲を拡张し、Analysis possible なマウスの発生・The stage of differentiation is a big one, and the combination of conditional dependencies is a must. (1) The method of 対 resembles the legacy of the 伝子の検検. Our research laboratory has submitted the standard replacement method for the germ cell series and sent it to us for confirmation. There are three kinds of IP3 receptor (IP3R), HGF/SF, and APC. The IP3R variant is closed and the detailed phenotype analysis is now available. HGF/SF is a type of allogeneic conjugation, and the placenta is incompletely formed during the viviparous period and is a cause of death. The function of HGF is as follows:またAPC缝子については, そのホモ合変variantが, 発生のごくInitial stage, that is, ちgastache enters In the past, it was necessary to introduce the same thing as the fatal thing, the same conditional dependency, and the different import. (2) APC is used to replace the enzyme in the ES cells according to the conditional dependence of the subject. APC's 14th high-end and low-end 2nd place, the LoxP arrangement, the insertion group Replacement of ES cell production and introduction of ES cells, and potential differences in ES cells are obtained. Confirmation of Cre enzyme and LoxP arrangement in ES cells The Cre enzyme is now available and the potential difference is maintained in the ES cells. PCR method and びサザンブロット method により, APC legacy そ子上でpurpose とするCre enzyme による group replacement えが开きている事をconfirmation した. The potential differentiating ES cells and Cre enzyme are replaced by the differentiating ES cells, and the current high-speed injection method is used to create the new system.