リンパ腫瘍におけるサイクリンD1トランスクリプトbの役割と診断、治療への応用

cyclin D1转录本b在淋巴肿瘤中的作用及其在诊断和治疗中的应用

基本信息

批准号：
10153273
负责人：
細川好孝
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10153273/
关键词：
サイクリンD1 悪性リンパ腫免疫組織化学モノクローナル抗体

项目摘要

我々が独自に単離したサイクリンDlトランスクリプトbのリンパ腫瘍における役割ならびに診断、治療への応用をめざし、今年は以下の諸点を明らかにした。1)サイクリンD1を過剰発現する30種の固型癌、血球系細胞培養株をRT-PCR,Northern blot法でスクリーニングした。その結果、t(11;14)を示すマントル性細胞腫瘍、多発性骨髄細胞腫瘍株で特異的にサイクリンDlトランスクリプトbが高発現していることを見いだした。さらに、トランスクリプトa,bを同時に認識するモノクローナル抗体を用いて、細胞内でトランスクリプトb蛋白産物を世界で初めて検出した。2)発現誘導系を用いたトランスクリプトbの機能解析。サイクリンD1トランスクリプトa,bのcDNAをLacoperator plasmidに挿入し、Lacrepressor vectorと供にマウスPro-B BAF3細胞に導入して、サイクリンD1トランスクリプトa,bを自由に発現誘導する系を樹立した。この系を用いてトランスクリプトa,b産物による細胞周期制御機構を検討いているが、予備的データとして、供にG1期を短縮することが判明している。3)免疫組織染色我々は、すでにCyclin D1に対するモノクローナル抗体5D4を作製し、免疫組織染色を確立した。我々はトランスクリプトb産物のC末端側ペプチドを合成および融合蛋白質を発現させ、特異的抗体の作製中である。その半減期が長いと考えられるトランスクリプトb産物に対する特異抗体を用いて、リンパ腫検体を免疫染色し、予後との相関、悪性度との関連について検討する。我々が独自に単離したサイクリンD1トランスクリプトbの蛋白質産物が今回初めて同定され、その機能の一端が明らかになりつつある。今後、免疫組織染色法の確立による診断、治療への応用、さらにトランスジェニックマウス作製によるin vivoでの生物学的機能の研究を推し進める。

为了我们在淋巴样肿瘤中独立分离的细胞周期蛋白DL转录本B及其在诊断和治疗中的应用，今年我们已经阐明了以下几点：1）使用RT-PCR和Northern Blot方法筛选了三十个固体癌和过表达细胞周期蛋白D1的血细胞培养菌株。结果，我们发现细胞周期蛋白DL转录本在地幔细胞肿瘤和多个髓样细胞肿瘤系中特异性表达（11; 14）。此外，在世界上首次使用单克隆抗体在细胞中检测到转录本B蛋白产物，这些抗体同时识别转录本A和B。 2）使用表达诱导器系统对转录本的功能分析。将细胞周期蛋白D1转录本A，B的cDNA插入纯质质粒中，并将其引入小鼠Pro-B BAF3细胞中，并与腔repressor载体一起建立一个诱导细胞周期蛋白D1转录本A，B的系统。使用该系统，我们正在研究转录产物A和B的细胞周期调节机制，作为初步数据，已经发现G1相也缩短了。 3）免疫组织学我们已经产生了针对细胞周期蛋白D1的单克隆抗体5D4，并确定了免疫调节学染色。我们合成了转录本B产物的C末端肽，并表达融合蛋白以生成特定的抗体。使用对转录本B产物的特异性抗体对淋巴瘤试样进行免疫染色，该抗体被认为具有长的半衰期，并且将研究与预后的相关性，并且将研究与恶性肿瘤的关系。我们独立隔离的细胞周期蛋白D1转录本B的蛋白质产物已首次被鉴定出来，部分功能开始澄清。将来，我们将通过产生转基因小鼠的生物学功能来促进对诊断和治疗的免疫组织化学染色和应用体内生物功能的研究。