癌抑制遺伝子BAP1を標的とした胸膜中皮種新規阻害薬の開発

开发针对抑癌基因 BAP1 的新型胸膜间皮瘤抑制剂

基本信息

批准号：
22K08294
负责人：
細川好孝
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08294/
关键词：
悪性胸膜中皮腫癌抑制遺伝子遺伝子編集技術 cDNAマイクロアレイ

项目摘要

・悪性胸膜中皮腫はアスベスト曝露に関連して発症し、発病までの期間は約20-30年と長期に渡る。2000年から2039年までの40年間で、中皮腫患者の死亡者数は10万人を超えると予測されている。多くは進行した状態で診断され、化学療法や免疫チェックポイント阻害薬の併用療法が行われているが、その効果は極めて限定的である。悪性中皮腫では、癌抑制遺伝子であるp16INK4a ，NF2 ， BAP1に不活化変異が高頻度に検出される。本研究では、胸膜中皮細胞を用いて癌抑制遺伝子ノックアウト株を作成し、中皮腫の増殖・浸潤・転移に関わる細胞内分子および阻害化合物を同定し、新規診断マーカーや新規治療薬の候補分子を探索することを目的とした。・我々は、NF2ノックアウト株で高発現する遺伝子としてFGF受容体2を、NF2/p16 ダブルノックアウト細胞株でCD高い発現する遺伝子としてCD24遺伝子を見出した。抗体を用いた組織アレイ解析では、FGF受容体2とCD24が新たな診断バイオマーカーの候補であることが示された。・今回、ゲノム編集技術を利用して、胸膜中皮細胞株でBAP1ノックアウト株を樹立した。コロニーアッセイの結果、BAP1ノックアウト株でコロニー形成能の有意な上昇を認めた。・さらに、我々はBAP1ノックアウト株で高発現する遺伝子群と低発現する遺伝子群を同定した。高発現遺伝子として、カルモジュリンキナーゼCAMK2Dが抽出された。・MTTアッセイによる細胞増殖阻害を指標として、400個小分子化合物ライブラリーを用いたBAP1ノックアウト株の予備的なスクリーニング実験を実施したところ、カルモジュリンキナーゼ阻害剤が抽出されて来た。この結果は、カルモジュリンキナーゼ阻害剤が、BAP1欠失胸膜中皮種に対する有望な阻害剤の候補であることを示唆している。

- 抗性胸膜间皮瘤与石棉暴露有关，长期持续约20至30年。从2000年到2039年的40年中，间皮瘤患者的死亡人数预计将超过100,000。大多数是在晚期条件下被诊断出的，并且给予化疗和与免疫检查点抑制剂的联合疗法，但其影响极为有限。在恶性间皮瘤中，经常检测到肿瘤抑制基因P16INK4A，NF2和BAP1中的灭活突变。这项研究旨在使用胸膜间皮瘤细胞创建敲除癌抑制基因的敲除菌株，鉴定细胞内分子和参与间皮瘤增殖，侵袭和转移的抑制性化合物，以及寻找新型诊断标记物和新型治疗治疗药物的潜在分子。我们发现FGF受体2是一种在NF2基因敲除菌株中高度表达的基因，而CD24基因是在NF2/P16双基因敲除细胞系中高度表达的基因。使用抗体的组织阵列分析表明，FGF受体2和CD24是新的候选诊断生物标志物。 - 这次，我们使用基因组编辑技术在胸膜间皮细胞系中建立了BAP1敲除菌株。菌落测定显示BAP1敲除菌株中菌落形成能力的显着增加。此外，我们确定了高度表达的基因组，而在BAP1敲除菌株中表达的基因组。将钙调蛋白激酶CAMK2D提取为高表达基因。 - 使用MTT分析的细胞生长抑制作用，对BAP1敲除菌株进行了BAP1基因敲除菌株的初步筛选实验，并提取了钙调蛋白激酶抑制剂。该结果表明，钙调蛋白激酶抑制剂是潜在的bap1缺陷胸膜间皮物种潜在抑制剂的候选者。