BCL6がん遺伝子とAPI2-MALT1融合遺伝子の機能解析と診断治療への応用

BCL6癌基因和API2-MALT1融合基因的功能分析及其在诊断治疗中的应用

基本信息

批准号：
13218150
负责人：
細川好孝
金额：
$ 2.69万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218150/
关键词：
BCL6 MALT1 マイクロアレイ two-hybrid法

项目摘要

染色体転座関連がん遺伝子BCL6ならびに我々自身が単離したAPI2-MALT1融合遺伝子の機能を解明することにより、悪性リンパ腫の診断、治療への臨床応用を実現することを目的として以下の諸点を明らかにした。1)BCL6プロジェクト cDNAマイクロアレイによる標的遺伝子の探索。BA/F3細胞に樹立したBCL6発現誘導系と蛍光プローブを用いた大規模なcDNAマイクロアレイを組み合わせてBCL6の新規標的遺伝子を探索し、三つの標的遺伝子を同定した。同定した遺伝子の発現がBCL6の直接な制御下にあるかどうかレポーターアッセイ法やゲルシフト法を用いて検討するため、それぞれのプロモーターを含むゲノムを単離し、現在レポーターコンストラクトを作成中である。2)API2-MALT1プロジェクト MALTリンパ腫に高頻度に認められる染色体転座t(11;18)(q21;q21)の本体がAPI2-MALT1遺伝子融合であることを明らかにしてきた。API2-MALT1,API2,MALT1それぞれをtagを付加した発現ベクターを用いて各種細胞株にトランスフェクトし蛋白の安定性を検討したところ、API2,MALT1はproteasome阻害剤の添加により半減期の延長が観察された。一方、API2-MALT1キメラはproteasome阻害剤を添加しなくても半減期の延長がみられた。また、細胞内局在を検討したところ、API2は核と細胞質に局在したが、API2-MALT1キメラの形成によって局在は細胞質へ移動した。さらにAPI2,MALT1の機能ドメインをbaitにして結合タンパク質を解析して、Two-hybrid assayによって結合蛋白質の候補を単離した。さらに、API2-MALT1トランスジェニックマウスの作成し解析中である。

通过阐明染色体易位相关的癌症基因BCl6和API2-MALT1融合基因的功能，我们已经隔离了自己，我们阐明了以下几点，目的是在诊断和治疗恶性淋巴瘤中实现临床应用。 1）Bcl6项目通过cDNA微阵列搜索靶基因。使用荧光探针的大规模cDNA微阵列与在BA/F3细胞中建立的Bcl6表达诱导剂系统结合使用，以搜索BCl6的新型靶基因，并鉴定了三个靶基因。为了研究确定的基因的表达是否在BCl6的直接控制下，已经隔离了包含每个启动子的基因组，并且目前正在创建一个记者构建体。 2）API2-MALT1项目已经揭示了染色体易位的主体T（11; 18）（Q21; Q21）在麦芽淋巴瘤中经常观察到，是API2-MALT1基因融合。当使用将标签添加到每个标签的标签的表达矢量中，将API2-MALT1，API2和MALT1转染到各种细胞系中时，观察到API2和MALT1的半衰期是通过添加蛋白酶体抑制剂来扩展的。另一方面，API2-Malt1嵌合体显示出延长的半衰期，而没有添加蛋白酶体抑制剂。此外，当我们研究亚细胞定位时，API2位于细胞核和细胞质中，但是通过形成API2-MALT1嵌合体迁移到细胞质。此外，使用API2和MALT1作为诱饵的功能结构域分析结合蛋白，并通过两杂交测定法分离候选蛋白。此外，目前正在准备和分析API2-MALT1转基因小鼠。