高等動物G1/S期移行を制御する遺伝子群の単離と発現制御に関する研究

高等动物G1/S期转变基因分离及表达调控研究

基本信息

批准号：
05780529
负责人：
細川好孝
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Mie University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780529/
关键词：
G1サイクリン cDNAクローニングサイクリンD2・D3 遺伝子発現 T-細胞受容体gamma

项目摘要

1 G1サイクリンcDNAのクローニングG1サイクリンは細胞周期の特にG1/S移行に重要な働きを担っており、種々の細胞内シグナルの最終ターゲットであると考えられている。我々は高等動物におけるG1/S移行の分子構造を研究する一環として、プロラクチン(PRL)依存性に細胞増殖を示すラットTlymphoma Nb2細胞からG1サイクリンcDNAのクローニングを行った。フローサイトメトリー解析から、GO/G1期に同調させたNb2細胞をPRL刺激すると、8〜12時間後にS期に進行することが判明した。G1後期のmRNAをテンプレートしてRT-PCR反応を行い、サイクリンD2,D3をコードするcDNA断片を単離した。G1後期のNb2細胞mRNAから常法により二種類のgt10cDNAライブラリーを構築した。サイクリンD2,D3のcDNA断片をプローブとしてスクリーニングを行い、サイクリンD2,D3の前駆体をコードするcDNAをクローン化した。細胞周期の進行に伴うサイクリンmRNA量の変動をノーザンブロット法により解析した。サイクリンD2の発現はG1中期に上昇し、S期以前に急速に減少した。一方サイクリンD3の発現はG1後期からS早期にピークに達した後徐々に減少した。これら二つのサイクリンは互いに異なる役割を担っていることが示唆された(投稿中)。サイクリンC,E並びにE2F1についてもcDNA断片を単離し、発現様式の解析を行った(未発表)。さらに、二種類のラットcdc2関連キナーゼのcDNAをクローン化した(投稿準備中)。現在、サイクリンのゲノムDNAの単離を行い、その発現調節機構の解析が進行中である。2 プロラクチンにより発現誘導される遺伝子のクローニング我々はPRLのシグナル伝達機構並びにT細胞機能制御の機構を解析するために、differential screening法を用いてPRLにより発現誘導される遺伝子のクローニングを行った。PRLはほぼall or noneにそしてドラマチックにT cell receptor chainの発現を誘導した。さらに、この発現誘導はチロシンキナーゼを介していない(投稿準備中)。今後T細胞の成熟、分化におけるPRLの役割が明らかとなることが期待される。

1克隆G1 Cyclin cDNAS G1细胞周期蛋白在细胞周期中起重要作用，尤其是G1/s转变，被认为是各种细胞内信号的最终目标。作为我们对上等动物中G1/S迁移分子结构的研究的一部分，我们从大鼠tlymphomaphomaNB2细胞中克隆了G1 Cyclin cDNA，这些NB2细胞表现出催乳素（PRL）依赖性细胞增殖。流式细胞仪分析表明，在8-12小时后，PRL刺激的NB2细胞与GO/G1相同步到S相。将晚期的G1 mRNA模板模板，并进行RT-PCR反应，以分离编码细胞周期蛋白D2和D3的cDNA片段。通过常规方法，在G1后期从NB2细胞mRNA构建了两种类型的GT10 cDNA文库。将细胞周期蛋白D2和D3的cDNA片段筛选为探针，并克隆编码细胞周期蛋白D2和D3前体的cDNA。随着细胞周期的进行，细胞周期蛋白mRNA水平的变化通过北印迹分析。在中等G1期间，Cyclin D2表达升高，并在S期之前迅速降低。另一方面，细胞周期蛋白D3的表达在从G1晚期到早期的峰值后逐渐降低。这两个细胞周期蛋白起着不同的作用（在邮政中）。还分离出细胞周期蛋白C，E和E2F1的cDNA片段，并分析了表达模式（未发表）。此外，克隆了两个大鼠CDC2相关激酶的CDNA（准备发布）。当前，细胞周期蛋白基因组DNA正在分离，对其表达调节机制的分析正在进行中。 2催乳素诱导的基因克隆我们使用差分筛选来分析PRL的信号传导和T细胞功能调节的机制，以及使用差分筛选的PRL诱导的基因克隆。 PRL诱导的T细胞受体链的表达几乎全部或全部且戏剧性。此外，这种表达的诱导不是由酪氨酸激酶介导的（为发布准备）。希望PRL在T细胞成熟和分化中的作用在将来会变得清晰。