高等動物G1/S期移行を制御する遺伝子群の単離と発現制御に関する研究

高等动物G1/S期转变基因分离及表达调控研究

• 批准号: 05780529
• 负责人: 細川 好孝
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05780529/
• 关键词: G1サイクリン; cDNAクローニング; サイクリンD2・D3; 遺伝子発現; T-細胞受容体gamma

1 G1サイクリンcDNAのクローニングG1サイクリンは細胞周期の特にG1/S移行に重要な働きを担っており、種々の細胞内シグナルの最終ターゲットであると考えられている。我々は高等動物におけるG1/S移行の分子構造を研究する一環として、プロラクチン(PRL)依存性に細胞増殖を示すラットTlymphoma Nb2細胞からG1サイクリンcDNAのクローニングを行った。フローサイトメトリー解析から、GO/G1期に同調させたNb2細胞をPRL刺激すると、8〜12時間後にS期に進行することが判明した。G1後期のmRNAをテンプレートしてRT-PCR反応を行い、サイクリンD2,D3をコードするcDNA断片を単離した。G1後期のNb2細胞mRNAから常法により二種類のgt10cDNAライブラリーを構築した。サイクリンD2,D3のcDNA断片をプローブとしてスクリーニングを行い、サイクリンD2,D3の前駆体をコードするcDNAをクローン化した。細胞周期の進行に伴うサイクリンmRNA量の変動をノーザンブロット法により解析した。サイクリンD2の発現はG1中期に上昇し、S期以前に急速に減少した。一方サイクリンD3の発現はG1後期からS早期にピークに達した後徐々に減少した。これら二つのサイクリンは互いに異なる役割を担っていることが示唆された(投稿中)。サイクリンC,E並びにE2F1についてもcDNA断片を単離し、発現様式の解析を行った(未発表)。さらに、二種類のラットcdc2関連キナーゼのcDNAをクローン化した(投稿準備中)。現在、サイクリンのゲノムDNAの単離を行い、その発現調節機構の解析が進行中である。2 プロラクチンにより発現誘導される遺伝子のクローニング我々はPRLのシグナル伝達機構並びにT細胞機能制御の機構を解析するために、differential screening法を用いてPRLにより発現誘導される遺伝子のクローニングを行った。PRLはほぼall or noneにそしてドラマチックにT cell receptor chainの発現を誘導した。さらに、この発現誘導はチロシンキナーゼを介していない(投稿準備中)。今後T細胞の成熟、分化におけるPRLの役割が明らかとなることが期待される。

1 G1 サ イ ク リ ン cDNA の ク ロ ー ニ ン グ G1 サ イ ク リ ン は cell cycle の に G1 / S transition especially important な に 働 き を bear っ て お り, kind of 々 の intracellular シ グ ナ ル の eventually タ ー ゲ ッ ト で あ る と exam え ら れ て い る. I 々 は higher animals に お け る G1 / S transition の molecular structure を す る link と し て, プ ロ ラ ク チ ン (PRL) dependence に を cells raised colonization in す ラ ッ ト Tlymphoma Nb2 cells か ら G1 サ イ ク リ ン cDNA の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー parsing か ら, GO/G1 phase に homology さ せ た Nb2 を PRL cells stimulate す る と, に S after 8 ~ 12 time period to す に る こ と が.at し た. Late G1 の mRNA を テ ン プ レ ー ト し て rt-pcr anti 応 を い, サ イ ク リ ン D2 and D3 を コ ー ド す る cDNA fragment を 単 from し た. In the later stage of G1, the mRNA of <s:1> Nb2 cells ブラリ ら was constructed by the common method によ によ and two types of <s:1> gt10cDNAラ ラ ブラリ を を を た た. サ イ ク リ ン D2 and D3 の cDNA fragment を プ ロ ー ブ と し て ス ク リ ー ニ ン グ を い, サ イ ク リ ン D2 and D3 の 駆 body before を コ ー ド す る cDNA を ク ロ ー ン change し た. The cell cycle <s:1> undergoes に accompanied by うサ <s:1> リ リ リ リ <s:1> changes in the amount of <s:1> mRNA をノ <s:1> ザ ザ ブロット ブロット ブロット ブロット method によ analysis of た た. Youdaoplaceholder0 リ リ リ リ the occurrence of D2 サ the に increase <s:1> in the middle of G1 and the に rapid に decrease <s:1> た before S. One party サ サ リ リ リ リ D3, た in the later stage of G1, にピ ら in the early stage of S, にピ にピ に に に, reaching た た, and then gradually 々に reduces た. こ れ ら two つ の サ イ ク リ ン は mutual い に different な る "を cut bear っ て い る こ と が in stopping さ れ た (contribute). Youdaoplaceholder0 サ リ リ びに C,E parallel びにE2F1に サ て て て cDNA fragment を単 separation リ, pattern <s:1> analysis を line った(not shown). Youdaoplaceholder0, two types of <s:1> ラットcdc2 association キナ キナ ゼ ゼ <s:1> cDNAを ロ ロ <s:1> immunization た(submission in preparation). Now, サ 単 リ リ リ ゲノム ゲノムDNA 単 単 is in the process of analyzing the regulatory mechanisms of を and そ in を lines が である. 2 プ ロ ラ ク チ ン に よ り 発 now induced さ れ る posthumous son 伝 の ク ロ ー ニ ン グ I 々 は PRL の シ グ ナ ル 伝 of institutions and び に t-cell function suppression の institutions を parsing す る た め に, differential screening method を with い て PRL に よ り 発 now induced さ れ る posthumous son 伝 の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. PRL は ほ ぼ all or none に そ し て ド ラ マ チ ッ ク に T cell receptor chain の 発 now を induced し た. Youdaoplaceholder0, <s:1> development induction of さらに チロシ キナ キナ ゼを ゼを introduction of な て な な (submission in preparation). In the future, T cells will <s:1> mature, differentiate におけるPRL <s:1> and be ready for が, ら となる となる とが とが. We look forward to される.