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細胞増殖因子と受容体の細胞内分解の分子機構

细胞生长因子和受体细胞内降解的分子机制

基本信息

批准号：
10163212
负责人：
宮澤恵二
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞増殖因子が細胞表面の受容体に作用すると、両者は複合体として細胞内に内在化・分解され、down-regulationされる。このプロセスは増殖シグナルの負の制御機構として重要な役割を担っていると考えられている。我々はこのプロセスに新規シグナル伝達分子Hrs-Hbp複合体が関与すること、その働きにはHbpのSH3ドメインに結合する蛋白質が必須であることを既に示している。このたびFar-Western法により、HbpのSH3ドメイン結合蛋白質を検索した。GSTとの融合蛋白質の形で大腸菌に発現したHbpをプローブとしてマウス肝臓cDNAライブラリーをスクリーニングした結果、脱ユビキチン化酵素UBP(ubiquitin-specific peptidase)ファミリーに属する蛋白質のcDNA断片が単離された。引き続き、全長のcDNAをクローニングすることにより、この蛋白質の全アミノ酸配列(1080残基)を決定した。アミノ酸配列の相同性の検討により、この蛋白質はすでにヒトで同定されているUBP-Yのマウスホモログであることがわかった(以下、mUBP-Yと略す)。ノザンブロッティング解析の結果、mUBP-Yは調べた限りのすべての組織に発現が確認でき、ubiquitousな蛋白質であることが考えられた。これは、結合パートナーであるHbpの発現パターンと一致するものである。GSTとの融合蛋白質を免疫原としてウサギのポリクローナル抗体を取得し、イムノブロッティング解析を行ったところ、mUBP-Yはl40kDaのバンドとして検出された。GST融合蛋白質を用いたpull-down assayによりHbp上のUBP-Y結合部位はSH3ドメインであると確認できた。また、UBP-Y上でHbpのSH3ドメインと結合する領域は分子の中央部のブロリン・リッチ配列であることを見い出した。現在、mUBP-Yの変異体を培養細胞に発現し、細胞増殖因子および受容体の細胞内分解への影響を検討中である。

Cellular colonization factor, cell surface capacitor, complex, intracellular internalization, down-regulation receptor. The imperial authority is responsible for the operation of the important service and cutting equipment. We need to verify that the combination of the molecular Hrs-Hbp complex and the Hbp SH3 protein must be verified by the new protocol. Far-Western and HbpSH3 conjugates were used to bind the protein and ligand. The GST fusion protein was isolated from the bacteria. The results showed that the fusion protein UBP (ubiquitin-specific peptidase) UBP (ubiquitin-specific peptidase) was isolated from the liver, and the cDNA fragment was isolated from the liver. The determination of amino acid (residue 1080) was determined by the determination of amino acid, full-length cDNA, protein, and protein. The same kind of acid, protein, protein, UBP-Y, protein, protein, The results were analyzed, the results were analyzed by the mUBP-Y software, the confirmation was confirmed by the tissue, and the results were verified by the ubiquitous protein test. The results show that the results are consistent with each other, and the results are in good agreement with each other. The results show that the results are consistent with each other, and the results are in good agreement with each other. GST fusion protein, immunogen, antibody, l40kDa protein, antibody, antibody, The GST fusion protein was confirmed by using the UBP-Y junction site of the UBP-Y junction on the pull-down assay fusion protein Hbp. On the UBP-Y, the Hbp and SH3 devices are combined with the field elements in the field. The central part of the unit is equipped with the command line and the output line is displayed. Now, mUBP-Y cell culture, cell proliferation factor, receptive body, intracellular decomposition, cell proliferation, cell growth, growth, growth and growth.