細胞増殖因子刺激による増殖促進・抑制のスイッチング機構に関する研究

细胞生长因子刺激促进/抑制增殖的切换机制研究

• 批准号: 14033210
• 负责人: 宮澤 恵二
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14033210/
• 关键词: チロシンキナーゼ; 細胞増殖因子; 遺伝子発現

細胞増殖因子は標的細胞により、増殖促進・抑制の相反するシグナルを伝達する。この促進・抑制のスイッチングを制御する機構の解明を目的として、本研究ではヒト肝癌細胞HepG2の肝細胞増殖因子(HGF)による増殖抑制の実験系を用いて検討を進めた。既に低濃度のMEKインヒビター存在下で細胞応答性のスイッチングがおこることを報告している。1.増殖抑制シグナルを伝達する受容体の検討HepG2細胞にはHGFの高親和性受容体であるc-Metが発現しているが、増殖抑制のシグナルが本当にc-Metを介して伝達されているかは明らかではなかった。そこでHGF受容体c-Metの細胞内ドメインをNGF受容体の細胞外ドメインとつないだTrk-Metを作成し、これを用いて安定発現細胞株を樹立した。MOCKの細胞はHGFのみによって増殖抑制されたが、Trk-Met発現細胞ではNGFによっても増殖抑制が見られるようになった。従って、c-MetがHepG2細胞で増殖抑制シグナルを伝達する本体であることが証明された。2.HGF刺激により発現レベルが変動する遺伝子の解析HGFによる増殖抑制作用は刺激後、2〜3日後以降に現れる。この理由として、細胞の遺伝子発現の変化により抑制シグナルを伝達するような性質が獲得された可能性が考えられる。そこで、無処理、および低濃度のMEKインヒビター処理したHepG2細胞をHGF刺激してRNAを調製し、DNAマイクロアレイにより遺伝子発現の変化を比較検討した。全部で約12000の遺伝子を解析し、その中からHGFによる増殖抑制に関与している可能性のある遺伝子(up-regulation34個、down-regulation18個)をピックアップした。real-time PCRによりマイクロアレイの結果をconfirmできたので、現在、どの遺伝子が関与しているかの検討を進めている。

Cell growth factors target cell growth, growth promotion, inhibition, and the opposite. The aim of this study is to investigate the mechanism of proliferation inhibition in HepG2 cells by hepatocyte growth factor (HGF). In the presence of MEK at low concentrations, cellular responses are reported. 1. Detection of c-Met in HepG2 cells against high affinity receptors for HGF. The cell lines of HGF receptor c-Met and NGF receptor c-Met were established. MOCK cells are resistant to HGF and NGF. The growth inhibition of HepG2 cells by c-Met and c-Met was demonstrated in vivo. 2. HGF stimulated the growth inhibition of HGF, and then decreased after 2 ~ 3 days. The reason for this is that the evolution of cellular proteins is inhibited and the nature of these proteins is examined. A comparative study of HGF stimulation of HepG2 cells, RNA modulation, DNA amplification and gene expression was conducted. About 12000 genes were analyzed and analyzed, and 34 up-regulation genes and 18 down-regulation genes were analyzed. Real-time PCR results confirm, present, transmit and discuss

项目成果

Miyazawa, K. et al.: "Two major pathways in TGF-β superfamily signaling"Genes Cells. 7. 1192-1204 (2002)

Miyazawa，K.等人：“TGF-β超家族信号转导中的两个主要途径”Genes Cells.7.1192-1204(2002)。

Mizuide, M. et al.: "c-Ski/SnoN interact with the N-terminal upper side of the oligomeric toroid of the Smad3MH2domain"J. Biol. Chem.. 278. 531-536 (2003)

Mizuide, M. 等人：“c-Ski/SnoN 与 Smad3MH2 结构域寡聚环形的 N 端上侧相互作用”J.