細胞増殖因子と受容体の細胞内分解の分子機構

细胞生长因子和受体细胞内降解的分子机制

基本信息

批准号：
11144213
负责人：
宮澤恵二
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞増殖因子が細胞表面の受容体に作用すると、両者は複合体として細胞内に内在化・分解され、down-regulationされる。このプロセスは増殖シグナルの負の制御機構として重要な役割を担っている。我々はこのプロセスに新規シグナル伝達分子Hrs-Hbp複合体が関与すること、その働きにはHbpのSH3ドメインに結合する蛋白質が必須であることを既に示している。昨年度は、このような蛋白質の候補としてユビキチン特異的プロテアーゼUBP-Yを同定した。本年度はHbpとUBP-Yの相互作用について詳細に検討するとともに、新たなHbp結合蛋白質のスクリーニングをおこなった。UBP-Y上のHbp-SH3結合部位を検討したところ、最終的には2箇所、各々9アミノ酸の領域にマッピングすることができた。SH3は通常、プロリンに富む配列に結合し、そのコンセンサス配列も知られているが、今回明らかにされた結合部位は、このコンセンサス配列に合致しない新しいタイプのものであることがわかった。いっぽう、あらたなHbp結合蛋白質としてファーウェスタン法によりポリユビキチンを同定した。実際、Hbpはユビキチンセファロースヘの結合能をもっており、相互作用を確認できた。また、Hbp上のユビキチン結合部位をマッピングしたところ、HbpのN-末端側の領域がユビキチン結合能をもつことを見い出した。この領域は既知のユビキチン結合蛋白質と相同性が見られない新規のものであった。現在、酵素活性やHbp結合能を欠失したUBP-Yの変異体、あるいはユビキチン結合領域を欠失したHbp変異体を過剰発現することにより、増殖因子と受容体の細胞内分解がどのように影響されるかを解析中である。

当细胞生长因子作用于细胞表面受体时，两者都被内部化和细胞内降解为复合物，并且被下调。这一过程是增殖信号的负调节机制的重要作用。我们已经表明，新型信号分子HRS-HBP复合物参与了此过程，并且与HBP的SH3结构域结合的蛋白质对于其功能至关重要。去年，泛素特异性蛋白酶UBP-y被确定为这种蛋白质的候选者。今年，我们详细讨论了HBP和UBP-Y之间的相互作用，并筛选了新的HBP结合蛋白。在检查了UBP-Y上的HBP-SH3结合位点后，我们能够将其映射到两个区域，每个区域是9个氨基酸。 SH3通常与富含脯氨酸的序列结合，其共识序列也已知，但是今天发现的结合位点是一种新型，与该共识序列不匹配。另一方面，通过远西方方法将多泛素鉴定为一种新的HBP结合蛋白。实际上，HBP具有与泛素Sepharose结合的能力，并证实了其相互作用。此外，当映射HBP上的泛素结合位点时，发现HBP N末端的区域具有结合泛素的能力。该区域是一个与已知的泛素结合蛋白没有同源性的新型区域。目前，我们正在分析如何过表达删除酶活性或HBP结合能力的UBP-Y突变体，或者正在删除泛素结合区域的HBP突变体会影响生长因子和受体。