気孔孔辺細胞における光情報伝達とH^+-ATPaseの活性制御

气孔保卫细胞中光转导和 H^+-ATPase 活性的调节

• 批准号: 10170224
• 负责人: 島崎 研一郎
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10170224/
• 关键词: 気孔; 孔辺細胞; 青色光; 細胞膜H^+-ATPase; 蛋白質リン酸化; 14・3・3蛋白質; プロテインキナーゼ; Ca^<2+>

本研究では、気孔孔辺細胞における青色光情報伝達とプロトンポンプ活性の制御機構を明らかにすることを目的として研究を行い、以下のような結果を得た。ソラマメ孔辺細胞プロトプラストに青色光を照射した後、ATP加水分解活性を測定すると、プロトン放出を良く説明できる活性の変動を見出した、このATP加水分解活性はvanadateに阻害され、細胞膜H^+-ATPaseの働きによるものであると推定された。そこで、孔辺細胞H^+-ATPaseの抗体を作成し、免疫沈降を行い、その沈降産物をSDS-PAGEで分離後、オートラジオグラフィーを行うとH^+-ATPase自身のリン酸化が見出された。このリン酸化は可逆的で、ポンプ活性の時間経過と良く一致した。また、プロテインキナーゼの阻害剤、K-252aを添加すると、このリン酸化は阻害され、ポンプ活性も阻害された。リン酸化部位はH^+-ATPaseのC-末の自己阻害領域を含む領域であること、リン酸化されるアミノ酸はスレオニンとセリンであることが示された。さらに、H^+-ATPaseの免疫沈降産物中に分子量32kDaの蛋白質が共沈し、この蛋白質は青色光照射により増加することが見出された。この蛋白質は抗体を用いた実験により、14-3-3蛋白質であると同定され、H^+-ATPase活性化に関与することが示唆された。一方、孔辺細胞の青色光情報伝達系に関与の予想される3つのプロテインキナーゼ(CDPK)とプロテインホスファターゼ(type1)の触媒サブユニットをクローニングし、その機能解析を行った。また、青色光によるプロトンポンプの活性化と気孔開口に、孔辺細胞内に存在する細胞内Ca^<2+>、おそらく、小胞体内のCa^<2+>が関与することを示唆する結果を得た。

The purpose of this study is to study the mechanism of cell activation by light emission and light emission. After irradiation with cyan light, ATP hydrolysis activity was measured, and the ATP hydrolysis activity was determined. The antibody to H^+-ATPase in the cells was prepared, the immune sedimentation was performed, the sedimentation products were separated by SDS-PAGE, and the acidification of H^+-ATPase itself was observed. The time of acidification is reversible, and the time of acidification is consistent. For example, if the K-252a is added, the acid is added, and the active is added. The acid site of H^+-ATPase has its own inhibition domain. The acid site has its own inhibition domain. The protein with molecular weight of 32kDa in the immunoprecipitation products of H^+-ATPase was co-precipitated and increased under cyan light irradiation. This protein is related to antibody activity, 14-3-3 protein activity, and H^+-ATPase activation. A square, pore cell cyan light information transmission system related to the prediction of the three types of color and color (CDPK) and color and color (type1) of the catalyst color and color information transmission system related to the function analysis. The results of the activation of Ca^<2+>, Ca^<2 +> and Ca^<2+> in the pore opening and pore inside the cell were obtained.