权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ESRとX線解析で捉える分子モーター・アクトミオシンの動的構造

ESR 和 X 射线分析捕获分子运动肌动球蛋白的动态结构

基本信息

批准号：
10175217
负责人：
荒田敏昭
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は筋収縮のエネルギー変換を蛋白質の分子構造に立脚して理解するために、最小単位であるアクチンとミオシン頭部の単量体コンプレックスのX線散乱実験とモーター蛋白用にESR技術改良を行った。Gアクチンを化学修飾し、全く重合しないがミオシンと結合するアクチンモノマーを調製し、ミオシン頭部S1との1:1複合体を形成させ、複合体のみの散乱強度曲線を得ることに成功していた。算出した慣性半径は50オングストローム、分子量165kDa、最大分子コード長は180オングストローム、アクチン-S1重心間距離72オングストロームとなった。今年度はこれらを指標にしてアクチン、S1の原子座標を用いて全散乱強度曲線を最適化するドッキング原子モデルを計算機により探索したところ、我々の電顕写真観察で予想されるように、S1先端近くにアクチンが結合することが確定した。しかしアクチンは対称軸を持つためS1がアクチンの4サブドメインそれぞれに結合する4つのモデルが残った。DNaseIを結合して非対称としたアクチンとS1複合体の実験により唯一のモデルが確定した。すなわちサブドメインIに結合するとき推定分子量、慣性半径は実験値(180kDa、50オングストローム)とよく一致した。さらに小さいドメイン間内部運動を考慮することにより完全にフィットできた。ADP中でも解離を最小限に抑えた条件で同様の実験することに成功し、分子量は変わらず慣性半径が約3-4オングストロームだけ小さくなった。モデル計算ではS1が長軸のまわりに90度以上回転した。この結果はS1の2つの主結合部位を回転中心とし第2の結合部位は隣接アクチンだけでなく主アクチンとも相互作用できることを示唆し、ATP加水分解中のアクチン-ミオシンの弱い結合の本体を捉えたものと考えれる。アクチン・ミオシン複合体モノマーの結晶化も精力的に押し進めているがまだ成功には至っていない。モーター蛋白用高感度ESR測定のためループギャップ共振器を試作し、コンピューター信号処理システムによりスペクトルを記録し調整中である。

The molecular structure of protein is understood by ESR technology, and the X-ray scattering technology of protein is improved. G: C: C: Calculate the inertia radius of 50 ° C, molecular weight of 165kDa, maximum molecular length of 180 ° C, and distance between centers of gravity of 72 ° C. This year, the atomic coordinates of S1 are used to optimize the total scattered intensity curve. The atomic coordinates of S1 are used to optimize the atomic coordinates of S1. The atomic coordinates of S1 are used to optimize the atomic coordinates of S1. The atomic coordinates of S1 are used to optimize the atomic coordinates of S1. The balance axis is connected to the axis of rotation. The axis of rotation is connected to the axis of rotation. The combination of DNase I and S1 complex is unique. The estimated molecular weight and inertia radius of the compound are consistent with each other (180kDa, 50 kDa). The internal motion of the small space is considered. ADP has a minimum dissociation condition and a molecular weight of about 3-4. The calculation of S1 is more than 90 degrees. As a result, the main binding site of S1 and S2 is located in the center of the second binding site, and the main binding site is located in the center of the second binding site. The crystallization process of the complex was successfully completed. High sensitivity ESR measurement for protein testing, signal processing, and recording