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ニンジンから得られた新規転移因子による遺伝子転写活性化機構の解明

通过从胡萝卜中获得的新型转座元件阐明基因转录激活机制

基本信息

批准号：
10874119
负责人：
小関良宏
金额：
--
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10874119/
关键词：
ニンジン転移因子 Tiプラスミド

项目摘要

ニンジン培養細胞のphenylalanine ammonia-lyase遺伝子のプロモーター領域に見い出された新規転移因子を35Sプロモーター:ルシフェラーゼ遺伝子:nos terminator(nosT)の前に結合したコンストラクトを作成し、これをニンジン培養細胞由来のプロトプラストにエレクトロポレーション法によって導入し、一過的発現について調べた。その結果、この転移因子を含まないコントロールと比較して、ルシフェラーゼ活性に有為な差は見られず、この転移因子はプロモーター活性の活性化を引き起こすのではないことがわかった。さらにこの転移因子をnos promoter:カナマイシン耐性遺伝子:nosT-35S:β-グルクロニダーゼ遺伝子:nosT-35S:ハイグロマイシン耐性遺伝子:nosTを含むTi-プラスミドの35S:ハイグロマイシン耐性遺伝子の前の部分に導入したものを作成し、これをAgrobacterium tumefaciensを介してニンジン培養細胞に導入し、様々な濃度のハイグロマイシンを含む培地で選抜して生育してくるカルスの数を調べた。その結果、75mg/lのハイグロマイシンを含む培地においては、転移因子を含まないコントロールのTi-プラスミドを導入した場合と転移因子を含むTi-プラスミドを導入した場合において、カルスの数に有為な差が見られなかった。また100mg/lでは両者ともにおいてカルスの生育は見られなかった。これらのことから、この転移因子を導入した場合において、脱分化状態のニンジン培養細胞を用いた場合においては、この転移因子はプロモーター活性の活性化を引き起こすのではないことがわかった。

In the field of phenylalanine ammonia-lyase gene expression in cultured cells, a new shift factor of 35S is introduced and a new shift factor of 35S is introduced into the cell culture system. The new shift factor of nos terminator(nosT) is introduced into the cell culture system. The results, the shift factor, and the activity of the enzyme are compared and analyzed. In addition, the gene transfer factor nos promoter: nosT-35S:β-glucuronic acid resistant gene:nosT-35S: glucuronic acid resistant gene: nosT contains Ti-glucuronic acid 35S: glucuronic acid resistant gene, and the gene transfer factor nos promoter:nosT contains Ti-glucuronic acid 35S: glucuronic acid resistant gene, and the gene transfer factor nos promoter: nosT contains Ti-glucuronic acid. The results showed that 75mg/l of the total amount of protein in the medium and the shift factor in the medium were different. 100mg/l In case of introduction of the transition factor, the cell culture in the dedifferentiated state is used, the transition factor is activated, and the cell culture in the dedifferentiated state is activated.