植物における転移型アクティベーションタギング・ベクターの構築

植物转座激活标签载体的构建

• 批准号: 12874106
• 负责人: 小関 良宏
• 金额: --
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12874106/
• 关键词: ニンジン; 植物培養細胞; タギング; 転移因子

ニンジン培養細胞から単離されたEn/Spm typeの非自律性因子Tdc1において,transposaseタンパク質が作用するして転移するのに必要な末端配列であるterminal inverted repeats等を残した転移・再挿入が可能である最小な転移因子を作製した。この中にニンジンから得られたphenylalanine ammonia-lyaseプロモーターの紫外線照射および病原菌感染によって強く誘導されるエンハンサー領域をタンデムにつなげたものを導入した。さらに35S-minimalプロモーターにtransposase遺伝子を結合したものを結合し,これをTi-プラスミドpABに導入した。これをアグロバクテリウムを用いてタバコ培養細胞に遺伝子導入し,カナマイシンで選抜し,遺伝子導入タバコ・カルスを150クローン得た。そのカルスを25mg/l,50mg/l,100mg/lのハイグロマイシンを含む固体培地上にまき,これらに対し紫外線ランプを用いて,1日に10分,5日間紫外線照射を行い,その後,連続暗下で培養した。その結果,100mg/lというタバコ培養細胞にとっては高濃度のハイグロマイシンを含む培地で生育してくるカルスが3クローン得られた。そこで,これらカルスにおいてハイグロマイシン耐性遺伝子近傍にエンハンサーを含むTdcが転移しているかどうかをハイグロマイシン耐性遺伝子,エンハンサーおよびTdcの末端配列の塩基配列をプライマーとして調べたが,Tdcは転移していないことがわかった。Tdcが転移していないにもかかわらず,高濃度のハイグロマイシンを含む培地で生育したのは,これらのカルスにおいて,この遺伝子が遺伝子発現が活発に起きているactive siteに挿入されたためと考えられた。

The non-automaticity factor Tdc1 of the En/Spm type in cultured cells is controlled by terminal inverted repeats, which are necessary for the function of transposase and protein. The ultraviolet ray irradiation and pathogen infection in the middle of the virus can be induced by phenylalanine ammonia-lyase. 35S-minimal transposase gene is introduced into the system. This is the first time that a gene has been introduced into cultured cells. 25mg/l,50mg/l,100mg/l of UV light was used in the medium of 1 day for 10 minutes, 5 days of UV light irradiation, and then cultured in the dark. As a result,100mg/l of the medium was used to culture the cells. For example, if the resistance gene is near the Tdc, the resistance gene is near the Tdc. If the resistance gene is near the Tdc, the resistance gene is near the Tdc. If the resistance gene is near the Tdc, the resistance gene is near the Tdc. If the resistance gene is near the Tdc, the resistance gene is near the Tdc. Tdc is the most active site in the world.

项目成果

Yoshimoto,Y.: "Isolation and Characterization of a cDNA for phenylalanine ammonia-lyase (PAL) from Dianthus caryophyllus (carnation)."Plant Biotechnology. 17・4. 325-329 (2000)

Yoshimoto, Y.：“石竹（康乃馨）苯丙氨酸解氨酶（PAL）的 cDNA 的分离和表征。植物生物技术”17・4（2000 年）。

Mato,M: "Flavonoid biosynthesis of white-flowered Sim carnations (Dianthus caryophyllus)."Scientia Horticulturae. 84・3. 333-347 (2000)

Mato，M：“白花康乃馨（石竹）的类黄酮生物合成”，《园艺科学》84·3（2000）。

Ozeki,Y.: "Phenylalanine ammonia-lyase genes involved in anthocyanin synthesis and the regulation of its expression in suspension cultured carrot cells."J.Plant Res.. 113・3. 319-326 (2000)

Ozeki, Y.：“苯丙氨酸解氨酶基因参与花青素合成及其在悬浮培养的胡萝卜细胞中的表达调节。”J.Plant Res.. 113・3 (2000)。