ヒト細胞を用いた外因性内分泌撹乱化学物質による生体毒性評価手法の開発

利用人体细胞开发外源性内分泌干扰物生物毒性评价方法

基本信息

批准号：
10875105
负责人：
森澤眞輔
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

環境中に存在する微量汚染物質の内、変異原性を有しかつ内分泌撹乱性を有する物質(例えば、プラスチック可塑剤として多用されるDBPやDEHP)、ガソリンからの除去が進められているベンゼン(白血病誘発物質)の代謝生成物であるベンゾキノン等、数種類の物質を選択・特定し、培養ヒト細胞を用いてDNAレベルでの変異原性試験、細胞レベルでの曝露試験を実施し、発癌性物質と内分泌撹乱性物質のDNAレベルでの作用機構の共通点および相違点を把握すると共に、その影響を定量的に比較するための指標とその定量方法を提示することを目指して研究を推進した。平成12年度は、特に、ヒト細胞を用いた新しい内分泌撹乱性の検出法を開発した。この試験系は、エストロゲンレセプターにエストロゲン(様)物質が結合してから、標的遺伝子が活性化するまでのプロセスを、ヒト細胞を用いて再現しようとする、いわゆるレポーターアッセイに分類される方法である。ヒト乳ガン細胞MCF-7に、レポーター遺伝子としてルシフェラーゼ遺伝子pGL3と、エストロゲン受容体の標的遺伝子の上流にあるエストロゲン応答配列(DNA塩基配列)EREc38を3個連結したpGL3-3 EREc38を用い、また、検出感度を向上させるために、エストロゲンレセプター発現ベクターとしてpHEGO-Hygroの利用を試みた。この試験法の適用には、(1)ヒト乳ガン細胞MCF-7にpHEGO-Hygroおよびレポーター遺伝子pGL3-3 EREc38を導入し、(2)評価対象の化学物質を曝露し、(3)発光基質を添加し、(4)発光量を測定する手順を踏むことになる(マイクロプレート使用)。17βエストラジオールを用いた試験により、既に酵母を用いる試験系にやや劣る程度の感度を確認した。

在环境中存在的痕量污染物中，选择和鉴定出几种类型的物质，包括诱变和内分泌干扰特性的物质（例如，经常用作塑料塑料化的DBP和DEHP），以及苯喹酮，苯甲酮，苯二氮的代谢产物，以及诱导的良好型，以及均可转化的二型，以及均可恢复的二型，以及均可转化的繁殖液，并被转移。使用培养的人类细胞进行了暴露测试，并促进了研究，目的是了解致癌物质的作用机理的共同和差异和在DNA水平上的内分泌破坏物质，并为其确定提供指标和定量方法。在2000年，特别使用人类细胞开发了一种用于检测内分泌干扰的新方法。该测试系统是一种被分类为所谓的记者测定法，该方法试图从雌激素（类似）物质的结合中复制该过程到使用人类细胞激活靶基因的过程。人类乳腺癌细胞MCF-7用于连接三个雌激素反应序列（DNA碱基序列）EREC38，它们与报道基因以及雌激素受体靶基因（DNA碱基序列）EREC38相连，并改善检测敏感性，试图将phego-Hygro作为雌激素受体表达vector vector vector。为了采用这种测试方法，（1）将Phego-Hygro和报告基因PGL3-3 EREC38引入到人类乳腺癌细胞MCF-7中，（2）暴露要评估的化学物质，（3）添加发光的底物，（4）遵循测量量的步骤（使用微盘）。使用17β雌二醇的测试证实，敏感性略低于使用酵母的测试系统的敏感性。