ノックアウトマラリアの作出(ネズミマラリアオーキネート特異抗原Pbs21の機能の解析)

敲除疟疾的创建（小鼠疟疾生长素特异性抗原Pbs21的功能分析）

• 批准号: 10877043
• 负责人: 鎮西 康雄
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877043/
• 关键词: ネズミマラリア; CTRP; Pbs21; 遺伝子ターゲッティング; オオキネート

1. オオキネートに特異的に発現される遺伝子をノックアウトしたマラリアを作出するため、ターゲットとなる遺伝子としてPbs21の他にCTRP(CS-TRAP Related Protein)を今回新たにクローニングした。2. 原虫の種々発育時期のRNAを抽出し、Northern Blotting分析を行なった結果、CTRPmRNAはookineteに特異的にあることが判った。3. CTRPタンパク質を大腸菌を用いてGST fusion proteinとして発現し、ポリクローナル/モノクローナル抗体を作製し、その発現時期と発現場所をしらべた。その結果、CTRPはookineteで蛋白質として発現していることを確認した。4. DHFR(dehydroforate reductase)遺伝子およびピリメサミ耐性遺伝子DHFR^★をPCRで増幅・クローニングした。5. CTRP遺伝子をノックアウトするためのDNAコンストラクトCTRP-DHFR^★を作製した。6. 同調培養によって108のmerozoitesを調製し、DNAコンストラクトCTRP-DHFR^★をエレクトロポレーションによりトランスフェクションし、ネズミに導入した。7. ピリメサミン処理により耐性獲得原虫をスクリーニングし、殖えた原虫の遺伝子構造を解析し、CTRPノックアウトマラリアが作製されたことを確認した。8. このCTRPノックアウトマラリア原虫を用いて、現在CTRPの機能の解析を行なっている。

1. The CS-TRAP Related Protein (CTRP) of Pbs21 is now a new protein. 2. RNA extraction, Northern Blotting analysis, CTRP mRNA and ookinete specificity 3. CTRP is a protein that can be used in E. coli to produce GST fusion protein. As a result, CTRP was able to confirm the protein content. 4. DHFR(dehydroformate reductase) gene is a resistant gene. 5. CTRP gene expression is controlled by DNA sequencing. 6. Homogeneous culture of 108 merozoites, DNA sequencing, CTRP-DHFR, DNA sequencing, DNA sequencing and DNA sequencing 7. The structure of the protozoa was analyzed and confirmed. 8. CTRP is now used to analyze the functions of CTRP

项目成果

M.Yuda et al.: "Ookinete thrombospondine-like anonymous protein,O-TRAP;structure and expression of an adhesive protein-like molecules." J Exp.Med. (in press). (1999)

M.Yuda 等人：“Ookinete 血小板反应素样匿名蛋白，O-TRAP；粘附蛋白样分子的结构和表达。”