幼若ホルモンによる遺伝子発現の調節と転写因子のクローニング

保幼激素对基因表达的调节和转录因子的克隆

• 批准号: 11142206
• 负责人: 鎮西 康雄
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11142206/
• 关键词: 幼若ホルモン; エクダイソン; 変態関連遺伝子; 転写因子; ルシフェラーゼ; EcR; USP

昆虫の幼若ホルモン(JH)は変態・休眠・相変異・性成熟などを調節する重要なホルモンである。このホルモンの作用機構については分子レベルの解析が進められ、これらの現象に関連する遺伝子の発現の調節に関わっていることが明らかにされつつある。しかし、いまだこのホルモンの受容体は同定・単離されておらず、作用機構の全貌が明らかにされるに至ってはいない。JHが変態の調節においてエクダイソン作用の阻害・修飾という作用を持っていることがいくつかの現象から判っており、この研究ではエクダイソンとエクダイソンリセプターEcRやそのパートナーであるUSP及びそれらによって誘導されるいわゆるearly geneやearly-late geneを含む核因子を解析した。その過程で、DNA結合ドメインを持つ新規な核受容体遺伝子GRF(GCNF related factor)のクローニングに成功した。この遺伝子はエクジソン濃度に同調して各組織での発現が確認され、結合するDNA配列も明らかにした。また、これら核受容因子と一般転写因子との間を取り持つコファクターBx42及びGCN5をクローニングした。ほ乳類培養細胞にEcR/USP発現コンストラクトと共に、luciferase上流域にEcRE(応答配列)をつないだレポターコンストラクトをcotransfectionし、エクダイソンにより発現が活性化される系を確立した。この系に、Bx42,GCN5の発現コンストラクトを導入することで、レポーター遺伝子の発現が増強されることを示した。今後この系を用いて、エクダイソンによるレポーター遺伝子の発現のJHによる制御について評価し、JHの関与する因子を探索する。このアプローチによってJH受容体候補となる因子の同定が出来るものと考えている。

Insect juvenile development (JH) changes state, dormancy, phase change, sexual maturity, and regulation. The mechanism of action of this phenomenon is related to the regulation of the occurrence of the molecule. The receiver of the system is constant and the action mechanism is complete. JH is a variable state of regulation, a medium state of regulation, a medium state of regulation, a state of regulation, a medium state of regulation, a medium state of regulation, a state of regulation, a state of The DNA binding process was successfully performed by the new receptor gene GRF(GCNF related factor). The DNA sequence of these proteins was identified by the identification of their homology in various tissues and by their binding to the DNA sequence. The core tolerance factor and the general writing factor are selected from the group consisting of Bx42 and GCN5. EcR/USP development in milk culture cells was established as a cotransfection, cotransfection, and activation system in the upstream region of luciferase. This system, Bx42, GCN5, has been shown to be able to generate more data. In the future, this system will be used to explore factors related to the development of JH and the control of JH. The JH receptor candidate and the factor are determined by the test results.

项目成果

Jean-Philippe Charles et al.: "Characterization and DNA-binding properties of GRF, a novel monomeric binding orphan receptor related to GCNF and βFTZ-F1"Eur. J. Biochem.. 266. 181-190 (1999)

Jean-Philippe Charles 等人：“GRF 的特征和 DNA 结合特性，一种与 GCNF 和 βFTZ-F1 相关的新型单体结合孤儿受体”Eur. J. Biochem. 266. 181-190 (1999)

Makoto Hirai et al.: "Nucleotide sequence of vitellogenin mRNA in the bean bug, Riptortus clavatus : analysis of processing in the fat body and ovary"Insect Biochem. Mol. Biol.. 28. 537-547 (1999)

Makoto Hirai 等人：“豆虫 Riptortus clavatus 中卵黄蛋白原 mRNA 的核苷酸序列：脂肪体和卵巢中加工的分析”Insect Biochem。

Ken Miura et al.: "Two hexameric cyanoprotein subunits from an insect, Riptortus clavatus : Sequence, phylogeny"Eur. J. Biochem.. 258. 929-940 (1999)

Ken Miura 等人：“来自昆虫 Riptortus clavatus 的两个六聚体蓝蛋白亚基：序列、系统发育”Eur。

Makoto Hirai et al.: "Identification and cDNA cloning of novel juvenile hormone responsive genes from fat body of bug, Riptortus clavatus by mRNA differential display"Insect Biochem. Mol. Biol.. 28. 181-189 (1999)

Makoto Hirai 等人：“通过 mRNA 差异显示，从昆虫 Riptortus clavatus 的脂肪体中鉴定和 cDNA 克隆新型保幼激素反应基因”Insect Biochem。