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植物の大規模ゲノムプロジェクト支援による天然物生合成系の逆遺伝学

大规模植物基因组项目支持的天然产物生物合成系统的反向遗传学

基本信息

批准号：
10878091
负责人：
斉藤和季
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

シロイヌナズナでは、現在までに3種類のセリンアセチル転移酵素SATaseアイソザイムの存在が知られているが、最近4種類目のSATaseをコードするゲノムおよびcDNA配列がデータベース上に報告された。そこでこのSAT106の機能解析を目的として、シロイヌナズナλYES cDNA libraryを用いてPCR法によりcDNAクローンの単離を行った。SAT106は全長約1kbであり、そのC末領域の1次構造はフィードバック阻害感受型、非感受型とは全く異なるタイプを示した。大腸菌発現系を用いた解析の結果、SAT106は大腸菌JM39/5のシステイン要求性を機能的に相補した。分子生物学におけるモデル植物であるシロイヌナズナでは、T-DNA挿入にもとづく変異体のタグラインシステムの整備が進んでおり、目的遺伝子の破壊変異体の分離に利用されている。本研究ではSATase遺伝子破壊変異体の分離を目的として、SAT-c、SAT-p、SAT-mについてスクリーニングを行った。その結果、SAT-cとSAT-mで一つずつラインが見い出された。また、いくつかの生理学的な結果から以前ミトコンドリア性のシステイン合成酵素として同定された蛋白質が、実はβ-シアノアラニン合成酵素ではないかと考えられた。そこでこのcDNAを大腸菌内で発現し、酵素活性測定、β-シアノアラニン合成酵素抗体を用いたイムノブロット分析によって確かに本蛋白質は、システイン合成酵素活性を有するものの実際にはβ-シアノアラニン合成酵素として機能していることを明らかにした。

This is not true. Currently, SATase transfer enzymes exist in all categories. The most recent four categories, such as SATase, transfer cDNA, and so on, have been listed in this category. The SAT106 machine can be used to analyze the target data, the target data and the λ YES cDNA library. The PCR method is used to analyze the cDNA data. The full length of the SAT106 is about the total length of the 1kb, and the field of the end of C # is used for the first time in the field of prevention and treatment. The main fungus is the result of the analysis of the results of the SAT106 fungus, and the correlation between the sexual function of the JM39/5 fungus and the sexual function of the bacteria. Molecular biology, molecular biology, biology, The purpose of this study is to analyze the data of SATase, SAT-c, SAT-p, SAT-m, and so on. The results show that the SAT-c SAT-m has a negative impact on the performance. The results of physiology were similar to the results of physiology. The results showed that the synthesis of enzymes was identical to that of protein and β-aminotransferase. The enzyme activity was determined, the enzyme activity was determined, and the antibody against synthetic enzyme was detected in cDNA bacteria. The activity of synthetic enzyme was determined by enzyme assay, and the activity of synthetic enzyme was determined.