テトラヒメナのFK506結合蛋白質の研究

四膜虫FK506结合蛋白的研究

• 批准号: 10878123
• 负责人: 沼田 治
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878123/
• 关键词: FK506; FKBP12; テトラヒメナ; カルシニューリン; 細胞質分裂; FK506結合蛋白質; カルシウムイオン; カルモジュリン; IP_3リセプター

FK506結合蛋白質(FKBP)は免疫抑制剤FK506と結合するとカルシニューリンの機能を阻害し、免疫担当細胞の働きを抑えることが知られている。我々はテトラヒメナにもFKBPが存在することを発見した。これは、この蛋白質が普遍的な生理機能に関与することを示唆している。この普遍的な生理機能を明かにすることが本研究の目的である。1.テトラヒメナのFKBP遺伝子をクローニングし、そのcDNAの全塩基配列を決定した。推定されたアミノ酸配列からテトラヒメナのFKBPは分子量12kDaでFK506結合部位を保持していた。ホモロジー検索の結果、ショウジョウバエ、ヒト、マウスのFKBP12と約60%の相同性を持ち、類似性は80%近いことが判った。2.テトラヒメナの同調分裂細胞をFK506で処理したところ細胞質分裂が阻害されることが明らかになった。3.テトラヒメナFKBP12の機能を明らかにするため:(1)抗-FKBP12抗体を用いたFKBP12の細胞内局在性の決定、(2)FKBP12に結合するカルシニューリンのような蛋白質の同定、などを計画した。その第一段階として大腸菌でリコンビナントFKBP12の大量発現を行い、リコンビナントFKBP12をウサギとモルモットに注射して抗-FKBP12抗体の作製に成功した。

众所周知，当FK506与免疫抑制剂FK506结合时，它会抑制钙调蛋白的功能并抑制免疫反应性细胞的功能。我们发现FKBP也存在于四氢烷中。这表明该蛋白与普遍的生理功能有关。这项研究的目的是揭示这种普遍的生理功能。 1。克隆四膜虫的FKBP基因，并确定其cDNA的整个碱基序列。基于推导的氨基酸序列，四氢烷的FKBP含有一个fk506结合位点，分子量为12 kDa。同源性搜索表明，在果蝇，人和小鼠中，它们与FKBP12的同源性约为60％，相似性接近80％。 2。用FK506治疗四膜有丝分裂细胞表明细胞因子被抑制。 3。为了阐明四膜虫FKBP12的功能：（1）使用抗FKBP12抗体确定FKBP12的亚细胞定位，（2）鉴定蛋白质（如钙调蛋白），例如结合与FKBP12的钙调蛋白。作为第一步，我们在大肠杆菌中进行了大量重组FKBP12的表达，并将重组FKBP12注射到兔子和豚鼠中，以成功产生抗FKBP12抗体。

项目成果

A.Watanabe: "The new Tetrahymena actin-binding proteins is localized in the division furrow" J.Biochem.123. 607-613 (1998)

A.Watanabe：“新的四膜虫肌动蛋白结合蛋白位于分裂沟中”J.Biochem.123。

Numata,O.,Fujiu,K.,and Gonda,K.: "Macronuclear division and cytokinesis in Tetrahymena."Cell Biol.Int.. (in press). (2000)

Numata,O.、Fujiu,K. 和 Gonda,K.：“四膜虫的大核分裂和胞质分裂”。Cell Biol.Int..（出版中）。

Gonda,K.,Nishibori,K.,Ohba,H.,Watanabe,A.,and Numata,O.: "Molecular cloning of the gene for p85 that regulates the initiation of Cytokinesis in Tetrahymena."Biochemical and Biophysical Research Communication. 246. 112-118 (1999)

Gonda,K.、Nishibori,K.、Ohba,H.、Watanabe,A. 和 Numata,O.：“调节四膜虫细胞分裂起始的 p85 基因的分子克隆。”生物化学和生物物理研究通讯。

Wang,S.,Nakashima,S.,Numata,O.,Fujiu,K.,and Nozawa,Y.: "Molecular cloning and cell-cycle-dependent expression of the acetyl-CoA synthetase gene in Tetrahymena cells."Biochem J.. 343. 479-485 (1999)

Wang,S.、Nakashima,S.、Numata,O.、Fujiu,K. 和 Nozawa,Y.：“四膜虫细胞中乙酰辅酶 A 合成酶基因的分子克隆和细胞周期依赖性表达。”Biochem J