テトラヒメナのFK506結合蛋白質の研究

四膜虫FK506结合蛋白的研究

• 批准号: 10878123
• 负责人: 沼田 治
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10878123/
• 关键词: FK506; FKBP12; テトラヒメナ; カルシニューリン; 細胞質分裂; FK506結合蛋白質; カルシウムイオン; カルモジュリン; IP_3リセプター

FK506結合蛋白質(FKBP)は免疫抑制剤FK506と結合するとカルシニューリンの機能を阻害し、免疫担当細胞の働きを抑えることが知られている。我々はテトラヒメナにもFKBPが存在することを発見した。これは、この蛋白質が普遍的な生理機能に関与することを示唆している。この普遍的な生理機能を明かにすることが本研究の目的である。1.テトラヒメナのFKBP遺伝子をクローニングし、そのcDNAの全塩基配列を決定した。推定されたアミノ酸配列からテトラヒメナのFKBPは分子量12kDaでFK506結合部位を保持していた。ホモロジー検索の結果、ショウジョウバエ、ヒト、マウスのFKBP12と約60%の相同性を持ち、類似性は80%近いことが判った。2.テトラヒメナの同調分裂細胞をFK506で処理したところ細胞質分裂が阻害されることが明らかになった。3.テトラヒメナFKBP12の機能を明らかにするため:(1)抗-FKBP12抗体を用いたFKBP12の細胞内局在性の決定、(2)FKBP12に結合するカルシニューリンのような蛋白質の同定、などを計画した。その第一段階として大腸菌でリコンビナントFKBP12の大量発現を行い、リコンビナントFKBP12をウサギとモルモットに注射して抗-FKBP12抗体の作製に成功した。

FK506-binding protein (FKBP) is an immunosuppressive agent that binds to FK506 The function of the skin is blocked and the immune cells are suppressed and suppressed. I 々はテトラヒメナにもFKBPがexistent することを発见した.これは, このprotein が universal なphysiological functions are related to することをshows している.このThe general physiological function of な明かにすることがThe purpose of this study is である. 1. テトラヒメナのFKBP 缝子をクローニングし, そのcDNAの全婩组arrayをdeterminationした. It is estimated that the FK506 binding site with a molecular weight of 12kDa and a FK506 binding site are maintained in the acid ligation of FKBP.ホモロジー検SOのRESULTS、ショウジョウバエ、ヒト、マウスのFKBP 12. Approximately 60% of the sameness is maintained, and 80% of the similarity is close to the same. 2. FK506 is a homogeneous dividing cell that blocks cytoplasmic division and inhibits cytoplasmic division. 3. Functional test of FKBP12 antibody: (1) Anti-FKBP12 antibody test FKBP12 Determination of intracellular locality, (2) determination of FKBP12 binding, binding of FKBP12 protein, and planning of FKBP12.そのFirst stage として coliform でリコンビナントFKBP12のlarge number of symptoms を行い、リコンビナンThe injection of FKBP12 anti-FKBP12 antibody was successfully completed.

项目成果

Watanabe,A.,Yonemura,I.,Gonda,K.,and Numata,O.: "Cloning and sequencing of the gene for a Tetrahymena fimbrin-like protein."Journal of Biochemistry. 127. 85-94 (2000)

Watanabe,A.、Yonemura,I.、Gonda,K. 和 Numata,O.：“四膜虫菌毛蛋白样蛋白基因的克隆和测序。”生物化学杂志。

A.Watanabe: "The new Tetrahymena actin-binding proteins is localized in the division furrow" J.Biochem.123. 607-613 (1998)

A.Watanabe：“新的四膜虫肌动蛋白结合蛋白位于分裂沟中”J.Biochem.123。

Fujiu,K.,andNumata,O.: "Localization of microtubules during macronuclear division in Tetrahymena and possible involvement of macronuclear microtubules in 'amitotical'chromatin distribution."Cell Structure and Function. 24. 401-404 (1999)

Fujiu,K.和Numata,O.：“四膜虫大核分裂过程中微管的定位以及大核微管可能参与‘有丝分裂’染色质分布。”细胞结构和功能。

Gonda,K.,Nishibori,K.,Ohba,H.,Watanabe,A.,and Numata,O.: "Molecular cloning of the gene for p85 that regulates the initiation of Cytokinesis in Tetrahymena."Biochemical and Biophysical Research Communication. 246. 112-118 (1999)

Gonda,K.、Nishibori,K.、Ohba,H.、Watanabe,A. 和 Numata,O.：“调节四膜虫细胞分裂起始的 p85 基因的分子克隆。”生物化学和生物物理研究通讯。

Wang,S.,Nakashima,S.,Numata,O.,Fujiu,K.,and Nozawa,Y.: "Molecular cloning and cell-cycle-dependent expression of the acetyl-CoA synthetase gene in Tetrahymena cells."Biochem J.. 343. 479-485 (1999)

Wang,S.、Nakashima,S.、Numata,O.、Fujiu,K. 和 Nozawa,Y.：“四膜虫细胞中乙酰辅酶 A 合成酶基因的分子克隆和细胞周期依赖性表达。”Biochem J