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スルファチドのセリンプロテアーゼ阻害活性を基盤とする新規酵素阻害剤の開発

基于硫苷脂的丝氨酸蛋白酶抑制活性开发新型酶抑制剂

基本信息

批准号：
11121235
负责人：
岩森正男
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

硫酸化脂質の示す酵素タンパク質の活性阻害は、1種の分子シャペロンとしてタンパク質の構造変化を起こすことによって発現されると予想される。今年度は、引き続いて硫酸化脂質によって阻害される酵素の検索を進め、構造と活性の相関を明らかにするとともに、硫化脂質の各種誘導体を合成し、阻害活性の発現に必要な構造について調べた。膵由来消化酵素としてプロテアーゼ以外にDNase Iが知られているため、DNase Iに対する硫酸化脂質の作用を調べた。環状DNA、pBluescript SK-II(+)5μgを基質として、ブタ膵DNase I(1μg)を作用させ、アガロースゲル電気泳動でDNAの分解量を測定したところ、コレステロール硫酸(CS)のみが阻害活性を示した。しかし、CSと界面活性剤の比も重要であり、タウロコール酸の場合、CSの1/5量で最大阻害活性を発揮し、その割合が少ない場合も多い場合も阻害できなかった。次に、好中球エラスターゼに対する硫酸化脂質の作用を調べた。CSならびにスルファチドは、膵エラスターゼの場合と同様のモル比で酵素活性を阻害した。さらに麻酔時の肺胞洗浄中には好中球エスタラーゼが分泌され、そのタンパク質濃度は、麻酔後1〜4時間かけて急増した。人工呼吸器による機械的刺激は好中球によるエラスターゼ分泌を促進することが分かった。しかし、酵素活性は、酵素蛋白量には比例せず、活性が抑制されていることが示唆された。好中球エラスターゼの活性を抑制している因子を探るために、好中球エラスターゼ抗体を利用して免疫沈降させ分析した結果、硫酸化脂質としてコレステロール硫酸の結合が確認できた。また、スルファチドの各種構造類似体を合成し、膵プロテアーゼに対する阻害活性を調べたところ、ブチル基はリグノセロイル基と同程度の活性であった。スフィンゴシン側鎖は阻害活性を発揮する上で、ほぼ充分な疎水性を保持していると予想される。

The inhibition of sulfated lipid enzyme activity is expected to be due to the structural transformation of a molecule. In this year, the synthesis of sulfated lipids and the regulation of structures necessary for the inhibition of enzyme activity are discussed. The role of DNase I in the regulation of sulfated lipids Cyclic DNA, pBluescript SK-II(+)5μg substrate, DNase I(1μg) were used to determine the amount of DNA decomposed by electrophoresis. The ratio of CS and interfacial active agent is important, and the maximum inhibitory activity of CS is 1/5 of that of CS. Second, the role of sulfated lipids is regulated by the good spherical structure. The enzyme activity is inhibited by the enzyme activity in the same way as in the case of CS. The concentration of serum increased rapidly 1 ~ 4 days after anesthesia. The mechanical stimulation of the artificial respirator can promote the secretion of estrogen in the middle of the body. Enzyme activity, enzyme protein content, enzyme activity inhibition, enzyme activity inhibition The results of immunoprecipitation analysis showed that sulfated lipids and sulfuric acid binding were confirmed. A variety of structural analogues are synthesized, and the protective activity of these compounds is modulated. In addition, it is necessary to maintain sufficient water resistance during the development of the protective activity.