人工タンパク質の新規設計による細胞および抗体ターゲティング機能分子の創製

通过人工蛋白质的新颖设计创建靶向功能分子的细胞和抗体

• 批准号: 11132258
• 负责人: 西野 憲和
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11132258/
• 关键词: ターゲティング素子; βαβαポリペプチド; RGDS; CDスペクトル; フラビン

細胞および抗体ターゲティング機能分子の創製を目指した新規設計人工タンパク質の構築を行うため、βαβαポリペプチドのループ部分に細胞接着活性を示すRGDS配列を導入したポリペプチド構造体と酸化活性を有するポリペプチド構造体の設計合成をおこなった。βαβαポリペプチドには3ヶ所のループが存在する。このループ部分を機能性部位として利用するため、Gly-Arg-Gly-Asp-Ser配列をループ部分として設計した。ペプチドの合成は固相法および液相法を組み合わせた方法で行った。構造を評価するため、各種溶媒中でCDスペクトルを測定した。βαβαポリペプチドは水溶液中でα-ヘリックスをあらわすCDスペクトルパターンを示した。水溶液中でのα-ヘリックス含率は約40%となり、α-ヘリックスとして設計した領域が二次構造を形成していることを示している。次にβαβαポリペプチドの内部疎水場にフラビンを導入し、ジヒドロニコチンアミド誘導体の酸化反応を試みた。ベンジルジヒドロニコチンアミドを基質として酸化速度を調べると、βαβαポリペプチドは対照化合物であるアセチルフラビンに較べて約5倍の酸化速度を示した。また、様々なアルキル鎖長の界面活性剤を添加すると酸化反応速度はアルキル鎖長に依存した。このことはポリペプチドの立体構造が活性発現に寄与していることを示唆している。また、2次構造の安定性は配位やモチーフによって異なるため、立体構造の安定性を評価する新たな手法として、トリプシンによる加水分解を試みた。加水分解速度はポリペプチド構造体の構築方法や配列に大きく依存していることがわかった。

Cell-based antibodies and functional molecules are created and designed according to new regulations. Artificial material building materials The cells were divided and the activity was shown, and the RGDS array was introduced and the acidified active structure was introduced and the structure of the acidification activity was designed and synthesized. βαβαポリペプチドには3ヶSOのループがexistingする. The functional parts of the このループ part are designed using するため, and the Gly-Arg-Gly-Asp-Ser arrangement is made of をループとして. The synthesis method of solid phase and liquid phase method is the combination method of synthesis and liquid phase. Structural evaluation and measurement of CD solvents in various solvents. βαβαポリペプチドは aqueous solution of α-α-ヘリックスをあらわすCDスペクトルパターンをshows theした. The content of α-でのα-ヘリックス in the aqueous solution is about 40%となり, α-ヘリックスとして design した domain が secondary structure を formation して いる こ と を Show し て い る. Sub-にβαβαポリペプチドの internal water field にフラビンを introduction し, ジヒドロニコチンアミド inducer の acidification reaction を test みた.ベンジルジヒドロニコチンアミドを matrix として acidification speed を adjust べると, βαβα ポリThe acidification speed of the であるアセチルフラビンに is about 5 times higher than that of べて.また、様々なアルキル久のInterface active 扤をAdd するとAcidification reaction speed はアルキル locklength にdependence した. The three-dimensional structure of the このことはポリペプチドのActivity is now present and the していることをshows the している.また、The stability of the secondary structure and coordination やモチーフによってisoなるため、The three-dimensional structure Stability evaluation 価する新たな Technique として, トリプシンによる Add water to decompose を test みた. The speed of water decomposition is the construction method of the structure, and the arrangement is large and the dependence is the same.

项目成果

富崎欣也: "Substrate specificities of artificial flavo-enzymes"Peptide Science-Present and Future. 76-77 (1999)

Kinya Tomizaki：“人工黄素酶的底物特异性”肽科学 - 现在和未来 76-77 (1999)。

富崎欣也: "Catalytic activities of an artificial protein with designed loops"Peptide Science-Present and Future. 78-79 (1999)

Kinya Tomizaki：“具有设计环的人工蛋白质的催化活性”肽科学 - 现在和未来 78-79 (1999)。