上皮間充織形質転換におけるインテグリン活性化と発がん機構の分子解析

上皮间质转化过程中整合素激活和致癌机制的分子分析

基本信息

批准号：
11138261
负责人：
佐邊壽孝
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Osaka Bioscience Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

上皮間充織形質転換、及び、細胞運動におけるインテグリン活性化に伴う細胞内の生化学的変化を調べた結果、インテグリン裏打ち蛋白質であるパキシリンとp130Casとのチロシンリン酸化の亢進が顕著な変化であることが分かった。パキシリンの全ての主要なリン酸化部位(4箇所)の同定は先年度に終了している。今年度は、パキシリンとp130Casとの機能とを対比させながら、それらのチロシンリン酸化の生理的役割を検討した。その結果、パキシリンは、上皮細胞の運動性に対して抑制的に作用することを見い出した。一方、この研究を行っている間に、p130Casのチロシンリン酸化は細胞運動性亢進に寄与することが報告され、我々もこの点は追試確認した。細胞の増殖形態に関して検討した結果、両者は級数的増殖速度には特に影響を及ぼさないが、細胞の飽和密度に顕著な影響を及ぼした。即ち、パキシリンは飽和密度を低下させ、p130Casは飽和密度を上昇させる作用を示した。これらの作用にも、それぞれのチロシンリン酸化が関与することが示唆された。従って、両者はチロシンリン酸化を介して、互いに見かけ上逆の効果を及ぼす可能性が考えられる。P130Casのチロシンリン酸化にはCrkやNckなどが結合し下流のシグナルを発生することが示されているが、パキシリンに関して検討した結果、これらの関与に関して否定的な結果を得、パキシリンチロシンリン酸化部位への結合蛋白質、特に細胞運動制御に関与するものは未だ探索中である。P130Casが作用するさらに下流の因子としてMAPKやPI3Kなども提唱されているが、パキシリンとこれらとの関連性に関しても現在検討中である。また、パキシリンの4箇所のチロシンリン酸化部位を部分的に変異させた際の効果に関しても検討し、その結果、パキシリンのチロシンリン酸化は、運動中におけるアクチン細胞骨格構造形成/再形成の時間的空間的制御に深く関与している事を見い出した。さらに、パキシリンの4箇所のチロシンリン酸化部位に対する抗体を、外部との共同研究により開発しており、すでに幾つかのものに関しては終了した。これらの抗体を用いて、in vitroで運動中の細胞や、各種癌組織におけるパキシリンの4箇所のリン酸化を検討を開始している。

在检查了细胞运动过程中与上皮间充质转化和整联蛋白激活相关的细胞内的生化变化后，发现Paxillin，整联蛋白蛋白和P130CAS之间增加的酪氨酸磷酸化增加是一个重大变化。去年，Paxillin的所有主要磷酸化位点（四个位点）的鉴定都结束了。今年，我们比较了帕西林和P130CA的功能，并检查了其酪氨酸磷酸化的生理作用。结果，我们发现帕西林对上皮细胞的运动起作用。同时，在进行这项研究时，据报道，P130CA的酪氨酸磷酸化有助于细胞运动，我们也证实了这一点。由于研究细胞增殖形态，两者都对串联生长速率没有特殊影响，但对细胞饱和密度有显着影响。也就是说，帕西林降低了饱和密度，而P130CAS表现出增加饱和密度的作用。有人提出这些作用还涉及酪氨酸磷酸化。因此，两者都可能通过酪氨酸磷酸化显然具有相反的影响。已经表明，CRK，NCK等与P130CAS的酪氨酸磷酸化结合并产生下游信号，但是Paxillin的研究在其参与方面产生了阴性结果，并且与Paxillin酪氨酸磷酸化位点结合，尤其是涉及细胞运动调节的蛋白质，仍在探索。 MAPK和PI3K也被提议是P130CAS起作用的进一步下游因素，但Paxillin与它们之间的关系目前正在考虑。我们还研究了帕西林酪氨酸磷酸化位点的部分突变的作用，并发现帕西林的酪氨酸磷酸化在运动过程中与肌动蛋白细胞骨骼结构形成/改革的时间和空间调节深远参与。此外，针对帕克西林四个酪氨酸磷酸化位点的抗体是通过与外部来源的联合研究开发的，有些已经终止。使用这些抗体，我们已经开始研究运动细胞和各种癌症组织在体外的四个位置的帕西林的磷酸化。