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抗がん剤の骨髄抑制に対する可溶性G-CSF受容体の予防効果

可溶性G-CSF受体对抗癌药物骨髓抑制的预防作用

基本信息

批准号：
11140255
负责人：
仁保喜之
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11140255/
关键词：
可溶性G-CSF受容体 G-CSF 造血前駆細胞抗がん剤骨髄抑制 CHO細胞

项目摘要

抗がん剤治療において骨髄抑制の副作用は必発であり、白血球減少の程度が抗がん剤の投与可能量を規定する。この抗がん剤による骨髄抑制は旺盛な増殖期にある造血前駆細胞が抗がん剤により障害を受けやすいことに起因する。そこで、可溶性G-CSF受容体を用いて内因性G-CSFの作用を阻害し、造血前駆細胞が白血球へ分化増殖する過程を抑制し、一時的に静止期に停めることで抗がん剤による白血球減少を予防する方法に思い至った。この予防法の確立に向けた基礎的検討として、これまでに我々は、CD34陽性細胞(未熟な造血前駆細胞)の約30%にG-CSF受容体の発現を認め、この細胞集団は高率に好中球へと分化すること、可溶性G-CSF受容体がG-CSFの活性を競合的に阻害することなどを明らかにしてきた。そこで、本年度は可溶性G-CSF受容体の大量作成を試みるとともに、可溶性G-CSF受容体の安全性を確認するため生理的な動態を検索した。最初に、cDNAの構造から推定されるG-CSF受容体細胞外部分のペプチドを合成し、それを抗原として家兎で抗体を作成した。この抗体を用いてウエスタンブロットを行なったところ、正常ヒト血清中に80-kDaと85-kDaの2種類の陽性バンドを検出した。この可溶性G-CSF受容体がG-CSFとの結合能を有することも証明した。続いて、G-CSF投与前後の血清と再生不良性貧血の患者の結成を用いて、可溶性G-CSF受容体の血清レベルが好中球に相関することを示した。さらに、G-CSF受容体cDNAの膜貫通部を挟むプライマーを作成しRT-PCRを行ったところ、骨髄細胞が成熟好中球へ分化するに従い可溶性G-CSF受容体の遺伝子発現が高率になることが判明した。これらの結果は、可溶性G-CSF受容体が生体内で好中球造血の調節機構に深く関与している可能性を示唆している。一方、CHO細胞に可溶性G-CSF受容体のcDNAを導入し、培養上清中にG-CSFの作用を阻害する活性を認めた。現在、純化精製による可溶性G-CSF受容体の大量作成を試みている。今後は作成した可溶性G-CSF受容体を用いて、マウスの抗がん剤による骨髄抑制の予防効果を検討する予定である。この結果、抗がん剤による骨髄抑制の予防法が確立できれば、より安全で有効な抗がん剤治療が可能になると期待される。

Side effects of anti-inflammatory therapy may occur, and the degree of leukopenia may be determined by the amount of anti-inflammatory therapy administered. The reason for this resistance is that the hematopoietic progenitor cells are resistant to the disease. In addition, soluble G-CSF receptors are used to inhibit the action of endogenous G-CSF, to inhibit the proliferation of hematopoietic progenitor cells, and to prevent leukopenia during the quiescent period. This method is based on the establishment of a baseline for G-CSF receptor development in approximately 30% of CD34-positive cells (immature hematopoietic progenitor cells), a high rate of differentiation in these cell populations, and inhibition of G-CSF activity by soluble G-CSF receptors. This year, a large number of soluble G-CSF receptors were tested and their safety was confirmed. Initially, the cDNA structure was postulated to be the extracellular part of the G-CSF receptor, and the antigen and antibody were produced. This antibody is used to detect the presence of 80-kDa and 85-kDa positive proteins in normal serum. The binding energy of soluble G-CSF receptor was proved to be very high. The serum levels of soluble G-CSF receptor were correlated with the serum levels of patients with aplastic anemia before and after administration of G-CSF. In addition, it was found that the expression of soluble G-CSF receptor cDNA was highly efficient when the membrane penetration part of G-CSF receptor cDNA was prepared by RT-PCR. These results indicate that soluble G-CSF receptors are closely related to the regulatory mechanism of hematopoiesis in vivo The cDNA of soluble G-CSF receptor was introduced into CHO cells, and the activity of G-CSF was inhibited in culture supernatant. At present, purification and purification of soluble G-CSF receptor in large quantities to prepare the test center. In the future, the soluble G-CSF receptor will be prepared for use, and its anti-inflammatory effect will be discussed. These results indicate that the prevention method of bone marrow inhibition is established, safe, effective, and expected.