出芽酵母Dpb11のDNA複製とS期チェックポイントに於ける機能

酿酒酵母 Dpb11 的 DNA 复制及其在 S 期检查点中的功能

• 批准号: 11143211
• 负责人: 荒木 弘之
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11143211/
• 关键词: DNA複製; チェックポイント; DNAポリメラーゼ; 複製開始; 細胞周期

出芽酵母の染色体DNA複製に必要なDNAポリメラーゼε(Polε)と相互作用するDPBIIは、染色体DNA複製とS期チェックポイントに関与している。Dpb11の機能を知るため、CHIP(Chromatin Immunoprecipitation)法によりDpb11,Polε,プライマーゼのクロマチンへの結合を種々の異変株を用いて調べ、以下のことを明らかにした。1)Dpb11はPolεと複合体を作り、この複合体形成がDpb11及びPolεの複製開始領域への結合に必要である。2)Polε-Dpb11複合体が複製開始領域に結合することが、Polε-プライマーゼ複合体の複製開始領域への結合に必要である。3)複製開始には開始領域が1本鎖へとアンワインディングされ、1本鎖DNA結合タンパク質であるRPAが結合すると考えられている。RPAの変異株を用いて調べてみると、Dpb11は複製開始領域に結合しないので、複製開始領域のアンワインディングにともなって、Polε-Dpb11が複製開始領域に結合すると考えられる。4)DPB11と遺伝的に相互作用するSLD(Synthetic Lethality with dpb11-1)3は、Sld4/Cdc45と同じようにG1期からS期初期に使用される複製開始領域に結合する。従ってSld3は、Dpb11-Polε複合体が結合する以前に複製開始領域に結合し、Dpb11-Polε複合体の複製開始領域の結合に必要であることが示唆される。

Budding yeast の chromosome DNA replication に necessary な DNA ポ リ メ ラ ー ゼ epsilon (Pol epsilon) と interaction す る DPBII は, chromosome DNA replication と S period チ ェ ッ ク ポ イ ン ト に masato and し て い る. Dpb11 の function を know る た め, CHIP (Chromatin Immunoprecipitation) method に よ り Dpb11, Pol epsilon, プ ラ イ マ ー ゼ の ク ロ マ チ ン へ の を kind of 々 の vision - strain を with い て べ, the following の こ と を Ming ら か に し た. 1) Dpb11 は Pol epsilon と complex を り, こ の complex formation が Dpb11 and び Pol epsilon の duplicate field へ の combining に necessary で あ る. 2) Pol epsilon - Dpb11 complex に が duplicate field combining す る こ と が, Pol epsilon - プ ラ イ マ ー ゼ complex の duplicate field へ の combining に necessary で あ る. 3) duplicate に が は began to field this lock へ と ア ン ワ イ ン デ ィ ン グ さ れ, this lock dna-binding タ ン パ ク qualitative で あ る RPA が combining す る と exam え ら れ て い る. RPA の - different strains を with い て adjustable べ て み る と, Dpb11 に は duplicate field combining し な い の で, duplicate の ア ン ワ イ ン デ ィ ン グ に と も な っ て, Pol epsilon - Dpb11 に が duplicate field combining す る と exam え ら れ る. 4) DPB11 と but 伝 に interaction す る SLD (Synthetic Lethality with DPB11-1) 3 は, Sld4 / Cdc45 と じ with よ う に G1 phase か ら "S early stage に use さ れ に る duplicate field combining す る. 従 っ て Sld3 は, Dpb11 - Pol epsilon complex が combining す る before に duplicate domain に combining し, Dpb11 - Pol epsilon complex の の duplicate field combining に necessary で あ る こ と が in stopping さ れ る.

项目成果

Yoichiro Kamimura: "DNA helicase III of Saccharomyces cerevisiae, encoded by YER176w(HEKI),highly unwinds covalently closed, circular DNA in the presence of a DNA topoisomerase and yRF-A."J.Biochem. 25. 236-244 (1999)

Yoichiro Kamimura：“由 YER176w(HEKI) 编码的酿酒酵母 DNA 解旋酶 III，在 DNA 拓扑异构酶和 yRF-A 存在的情况下高度解开共价闭合的环状 DNA。”J.Biochem。

Hiroshi Masumoto: "Dpb11 controls the association between DNA polymerase α and ε, and the ARS region of budding yeast."Mol.Cell.Biol.. (in press).

Hiroshi Masumoto：“Dpb11 控制 DNA 聚合酶 α 和 ε 以及芽殖酵母 ARS 区域之间的关联。”Mol.Cell.Biol..（出版中）。