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ゲノム情報を利用した転写因子の標的遺伝子単離法の開発

利用基因组信息开发转录因子靶基因分离方法

基本信息

批准号：
11149216
负责人：
高橋直樹
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11149216/
关键词：
転写調節動物発生ホメオボックス線虫ゲノム情報標的遺伝子

项目摘要

高等植物の発生過程は多くの転写因子の空間的、時間的に特異な発現によってコントロールされていると考えられる。ホメオボックスやZnフィンガーなどのモチーフを利用したスクリーニングやゲノムプロジェクトなどによって、これまでに数多くの転写因子をコードする遺伝子がクローン化されてきた。しかしこれらの転写因子が発現制御する標的遺伝子群についてはほとんど明らかにされていない。我々はマウスを実験材料として、転写因子の抗体を用いた標的遺伝子クローン化法を開発し、Hox遺伝子のいくつかの標的遺伝子を特定してきた。本研究の目的は、ゲノム情報の明らかになっている線虫をモデル動物として、効率の良い標的遺伝子群の単離法を開発し、多くの動物種で保存されている、発生過程における転写調節機構を明らかにすることである。昨年度作製したタグ付き転写因子導入線虫個体を用いて、転写因子が生体内で結合している配列を濃縮したDNAプールを調製した。この中に濃縮された配列(標的配列)をゲノムDNAチップを用いて検出することができることを示すためにチップを試作し、条件の検討を行った。昨年度作製した、短い(約100bp)線虫ゲノムDNA断片をλgt10ベクターに組み込んだライブラリーを用い、その挿入配列をPCR法によって調製した。このゲノム断片をスポットしたゲノムDNAチップを試作した。線虫全ゲノム中の標的配列を明らかにするためには、10万スポットのチップを必要とするが、今回は1000スポットのチップを作製し、ラジオアイソトープラベルプローブによる検出、Cy3,Cy5を用いた comparative hybridizationなどの条件について検討を行った。

In the process of higher plant life, the special characteristics of writing factors in space and time are available. I don't know what to say. I don't know. I don't know. This is the first time to write a factor. This is the sub-group of the system. This is the first time that you can read the information. We check the material, write the factor antibody and use the sub-Elisa method of the Hox sub-system to determine the specific information of the sub-system of the sub-system. In this study, the purpose of this study is to ensure that the animal products are used in the laboratory, the sub-group method in which there is a good rate of health, the preservation of animal products in many ways, and the health care system in the laboratory. Last year, we made sure that the writing factor was imported into the worm system. The combination of the writing factor and the writing factor in the body was arranged in the DNA system. In this section, you will be assigned a column (DNA). You will be able to show that you are in a row, and the condition will be in a row. Last year, 100bp was used to determine the size of DNA fragments. λ gt10 fragments were used to make sure that the PCR method was used. The fragments are broken, the fragments are broken, the DNA is broken, the pieces are made. The list of worms in the whole world shows that it is necessary to know that it is necessary, that it is necessary to do so in 100000, that it is necessary to do so, and that it is necessary to do so. This time, it is necessary to do so. In this case, it is necessary to