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免疫精製法を用いた転写ネットワークの解析

使用免疫纯化方法分析转录网络

基本信息

批准号：
14014230
负责人：
高橋直樹
金额：
$ 4.48万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14014230/
关键词：
転写調節標的遺伝子マイクロアレイクロマチンゲノム

项目摘要

我々は、MATα2などいくつかの酵母転写因子にエピトープタグを結合したコンストラクト約30を作製し、これらの転写因子が細胞内で直接結合している標的配列を抗体を用いて濃縮し、DNAマイクロアレイで全ゲノム中の結合配列を同定してきた(ChIP on Chip法)。最近Leeらによって、酵母の約100の転写因子の標的配列をChIP on Chip法で同定したという報告があった(Science298,799(2002))。我々が解析中の転写因子のいくつかは、その中に含まれていたが、結果が異なっていた。CRZ1,PH04などの転写因子については、我々は既知標的遺伝子の近傍の結合解列の濃縮を確認できたが、Leeらの報告では確認できていない。この相違の原因を明かにするため、培養条件、免疫精製法の条件の検討などを行なった。Leeらはすべての転写因子の解析は、酵母の培養を同一条件でおこなっているが、我々の結果と相違の見られた転写因子の多くは、外部からのシグナルによってリン酸化などの修飾を受け、転写調節活性が変化するものであり、培養の条件によって検出される標的配列が大きく変化するということを明かにした。また、タグの位置や種類、架橋の有無によっても結果に違いの生じる転写因子が存在することも明かになった。これらの成果をふまえて、MATα2,MCM1など既に解析した転写因子に加え、MATα1,STE12などの転写因子の解析を行ないつつあり、酵母mating typeの決定に関わる転写ネットワークの解明を目指している。

The yeast transcription factor (MAT α 2) binds directly to the target in the cell, and the binding sequence of the yeast transcription factor (MAT α 2) binds directly to the target in the cell, and the binding sequence of the DNA transcription factor (MAT α 2) binds directly to the target in the cell. Recently, Lee's Chip on Chip method was used to determine the target alignment of the yeast's writing factor of about 100 (Science 298, 799 (2002)). I'm trying to analyze the factors in writing, and the results are different. CRZ 1, PH 04 The reasons for this violation are clearly stated, the culture conditions, and the conditions for immunopurification are discussed. The analysis of transcription factors in yeast culture under the same conditions, the results of which are contrary to those of the transcription factors, the modification of transcription factors, the regulation of activity, and the cultivation conditions. The location, type, and presence of the bridge result in the occurrence of a violation. The results of this study include: MAT α 2, MCM 1, MAT α 1, STE 12, MAT α 2, STE 13, MAT α 2, STE 14, MAT α 1, STE 15, MAT α 2, STE 16, MAT α 1, STE 17, MAT α 1, STE 18, MAT α 2, STE 19, MAT α 1, STE 12, STE 19, MAT α 1, STE 19, MAT α 2, STE 19, MAT α 1, STE 19, MAT α 1, STE 19, STE 19,