核内レセプターと基本転写装置をつなぐコアクチベーターネットワークの解析

连接核受体和基本转录机制的共激活子网络分析

基本信息

  • 批准号:
    11154216
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.34万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
  • 财政年份:
    1999
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1999 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

核内レセプターのリガンド依存的な転写活性化には、ここ数年の研究により、コアクチベーターと呼ばれる蛋白質群が関わっていることが明らかとなってきた。これまでに、コアクチベーターと思われる蛋白質は多数クローニングされているが、細胞内に普遍的に存在するため、その機能の解析が灘しかった。そこで、我々は、ニワトリBリンパ細胞株DT40の遺伝子ノックアウトの系を用い、ヒストンアセチル化酵素活性(HAT)を持つ3種のコアクチベーター(TIF2、SRC1、ACTR)のノックアウト細胞の作成を進めている。ノックアウト細胞の作成にニワトリ由来の細胞を使用するため、最初に、TIF2、SRC1、ACTRのニワトリホモログのクローニングを行った。これらのコアクチベーターは鳥類においても高度に保存されており、核内レセプターと相互作用する領域やHATドメインが存在することが分かった。このcDNA配列をもとにプライマーを設計し、ゲノムDNAをPCRにより増幅し、PASドメインをコードする領域を薬剤耐性遺伝子に置換した。こうして作成したノックアウトコンストラクトをDT40細胞に導入することにより、コアクチベーター遺伝子が破壊された細胞をスクリーニングし、現在までに、TIF2とACTRのノックアウト細胞を樹立した。その結果、TIF2のノックアウトによりステロイドホルモンによる転写活性化は大きく影響を受けるが、ビタミンAやDなどの非ステロイド系の情報伝達への影響は小さいこと、ACTRのノックアウト細胞においては、これまで調べた限りでは、核内レセプターの転写活性化に影響がでないこと等が明らかになっている。
Within the nuclear レ セ プ タ ー の リ ガ ン ド dependent な planning write activeness に は, こ years こ の study に よ り, コ ア ク チ ベ ー タ ー と shout ば れ る protein group of が masato わ っ て い る こ と が Ming ら か と な っ て き た. こ れ ま で に, コ ア ク チ ベ ー タ ー と think わ れ る protein は most ク ロ ー ニ ン グ さ れ て い る が, intracellular に common に す る た め, そ の function analytical が の beach し か っ た. そ こ で, I 々 は, ニ ワ ト リ B リ ン パ cell lines DT40 の posthumous son 伝 ノ ッ ク ア ウ ト の を use い, ヒ ス ト ン ア セ チ ル phenoloxidase activity (HAT) three の を hold つ コ ア ク チ ベ ー タ ー (TIF2, SRC1, ACTR) の ノ ッ ク ア ウ の ト cells into を into め て い る. の ノ ッ ク ア ウ ト cells into に ニ ワ ト リ origin を の cells using す る た め, initially に, TIF2, SRC1, ACTR の ニ ワ ト リ ホ モ ロ グ の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. こ れ ら の コ ア ク チ ベ ー タ ー は birds に お い て も highly に save さ れ て お り, nuclear レ セ プ タ ー と interaction す る field や HAT ド メ イ ン が exist す る こ と が points か っ た. こ の cDNA match column を も と に プ ラ イ マ ー を design し, ゲ ノ ム を DNA PCR に よ り raised し, PAS ド メ イ ン を コ ー ド す る field を 薬 tonic patience heritage 伝 son に replacement し た. こ う し て made し た ノ ッ ク ア ウ ト コ ン ス ト ラ ク ト を DT40 cells に import す る こ と に よ り, コ ア ク チ ベ ー タ ー posthumous son 伝 が broken 壊 さ れ た cells を ス ク リ ー ニ ン グ し, now ま で に, TIF2 と ACTR の ノ ッ ク ア ウ を ト cells establish し た. そ の results, TIF2 の ノ ッ ク ア ウ ト に よ り ス テ ロ イ ド ホ ル モ ン に よ る planning write activeness は big き く を by け る が, ビ タ ミ ン A や D な ど の non ス テ ロ イ ド is の intelligence 伝 da へ の は small effect さ い こ と, ACTR の ノ ッ ク ア ウ ト cells に お い て は, こ れ ま で adjustable べ た limit り で は, nuclear レ セ プ タ ー の Youdaoplaceholder0 write about the activation of に, which affects がでな, と, と, etc. Youdaoplaceholder4, ら, になって, になって, る.

项目成果

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    $ 1.34万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
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