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核内レセプターと基本転写装置をつなぐコアクチベーターネットワークの解析

连接核受体和基本转录机制的共激活子网络分析

基本信息

批准号：
12028219
负责人：
西川淳一
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12028219/
关键词：
核内レセプターコアクチベーター DT40

项目摘要

ステロイドホルモン等の脂溶性生理活性物質はそれぞれの標的器官の細胞内に存在する特異的なレセプターを介して、その作用を発揮する。これらのレセプターは、それ自身がDNA結合性の転写調節因子であり、それぞれのリガンド刺激に応じて標的遺伝子の発現を転写レベルで調節する。ここ数年の研究により、これら核内レセプターのリガンド依存的な転写活性化には、コアクチベーターと呼ばれるタンパク質群が関わっていることが明らかとなってきた。これまでに、コアクチベーターと思われるタンパク質は多数クローニングされているが、細胞内に普遍的に存在するため、その機能の解析が難しかった。そこで、我々は、ニワトリBリンパ細胞株DT40の遺伝子ノックアウトの系を用い、ヒストンアセチル化酵素活性(HAT)を持つ3種のコアクチベーター(TIF2、SRC1、ACTR)のノックアウト細胞の作成を行い、その性状の解析を行った。ノックアウト細胞の作成にニワトリ由来の細胞を使用するため、最初に、TIF2、SRC1、ACTRのニワトリホモログのクローニングを行った。これらのコアクチベーターは鳥類においても高度に保存されており、核内レセプターと相互作用する領域やHATドメインが存在することが分かった。このcDNA配列をもとにプライマーを設計し、ゲノムDNAをPCRにより増幅し、PASドメインをコードする領域を薬剤耐性遺伝子に置換した。こうして作成したノックアウトコンストラクトをDT40細胞に導入することにより、TIF2とACTRのノックアウト細胞及びTIF2とSRC-1のダブルノックアウト細胞株を樹立した。その結果、TIF2のノックアウトによりエストロゲンやグルココルチコイド等のステロイドホルモンによる転写活性化は大きく影響を受けるが、ビタミンAやDなどの非ステロイド系の情報伝達への影響は小さいこと、ACTRやSRC-1の核内レセプターの転写活性化に対する寄与は小さいこと等を明らかにした。

Lipid-soluble physiologically active substances, such as those found in the cells of target organs, play an important role in mediating the effects of lipid-soluble substances. These factors regulate the expression of DNA binding genes, and regulate the expression of DNA binding genes. This is the result of several years of research on the activation of nuclear power plants and their dependence on nuclear power plants. The analysis of these functions is difficult because they exist in cells everywhere. In this paper, we use the genetic component of the Newt RiB Lincell line DT40 to produce three types of Newt RiB Lincells (TIF2, SRC1, and ACTR) with high HAT activity and analyze their characteristics. The cells that make them are used in the first place, TIF2, SRC1 and ACTR. The birds are highly conserved and interact with each other in the nuclear domain. This cDNA sequence is designed to increase the PCR amplification, PAS amplification, and DNA sequencing. This is the first time that we have established DT40 cells and TIF2 and ACTR cells and TIF2 and SRC-1 cells. The results show that TIF2 has A large impact on the activation of the nuclear site, and ACTR SRC-1 has a small impact on the activation of the nuclear site.