抗体のクラススイッチに先行して誘導されるGermline転写産物の機能解析

抗体类别转换前诱导的种系转录物的功能分析

• 批准号: 11155215
• 负责人: 菅井 学
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11155215/
• 关键词: クラススイッチ; B細胞; 分化; RNA; 免疫; くみかえ; 抗体; 修ふく

Germline転写産物のクローニングについては、SμSαともに終了した。しかし、T7/T3RNApolymeraseを用いたIn vitro転写は転写されたRNA分子がDNAと会合した状態で存在するため、転写産物の特性の解析には使用できなかった。そこで、1)RNAのセルフスプライシング活性を評価する目的にてE.Coli内でこのgermline ranscriptを発現させ、そのプロダクトをNorthern blotにて解析した結果、センスストランド転写産物特異的に5'/3'エクソンプローブともに検出できるspliced product様のバンドを同定した。現在このプロダクトの構造解析を行っているところである。2)また、Hela細胞の核抽出液を用いたIn vitro転写を行うためのconstructの構築中である。クラススイッチを特異的に抑えるある種の阻害剤を見い出した。この阻害剤の基質をある種のDNA polymeraseと想定して解析を行っている。DNA polymerase:cell cycleの解析からDNA polymeraseαは除外した。Polα/δ/εの阻害剤、aphidicolinは細胞毒性が高くクラススイッチを特異的に抑える確証は得られなかった。DNA polymraseβに関しては、小山らの作成したpolβk.O.マウスを入手し、現在irradiated RAG2-/-マウス(Dr.F.Altら。VDJ組み換え酵素の欠失のためリンパ球ができない)にfetal liver transferを開始している。今後、Germline転写産物のクラススイッチへの関与については、過剰発現と発現抑制によって行う。1)過剰発現:脾臓B細胞へのレトロウィルスによる遺伝子導入の系をたちあげた。現在、SμとSαのgermline transcriptのレトロウィルスを調整中。2)発現抑制:germline転写産物をターゲットとしたハンマーヘッド型のリボザイムを構築中。Ku80破壊マウスについては、human IgM transgenicマウス、human light chain transgenicマウス(この二つの抗体遺伝子によりB細胞ができる。)と交配し、それぞれのヘテロの個体を得ている。

Germline is the product of Germline. T7/T3 RNA polymerase is used In the analysis of RNA molecules in the presence of DNA. For the purpose of evaluating the activity of RNA in E. coli, the germline ranscript was generated, and the Northern blot analysis of RNA in E.Coli was performed. The results showed that the 5'/3' split product was identified. Now, the structural analysis of this paper is carried out. 2) The nuclear extract of Hela cells was used In vitro to construct the cell. A special kind of resistance. The DNA polymerase of this kind of inhibitor is used to determine the molecular structure of DNA. DNA polymerase:cell cycle analysis except DNA polymeraseα analysis. Polα/δ/ε inhibitors, aphidicolin are highly cytotoxic and specific inhibitors are confirmed. DNA polymerase β is related to the formation of polβk.O. and is now irradiated RAG2-/-. VDJ group enzyme deficiency and protein transfer start In the future, Germline will write the product's relationship with the development, occurrence and suppression of the development. 1)The discovery of B cells in the spleen is a complete process of gene introduction. Now, Sμ Sα2) Emergence inhibition:germline is the product of a new type of production. Ku80, human IgM transgenic, human light chain transgenic () Mating, mating, mating.