発現クローニングで単離したα1,4-N-アセチルグルコサミン転移酵素の機能解析

通过表达克隆分离的α1,4-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的功能分析

基本信息

批准号：
11159204
负责人：
中山淳
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11159204/
关键词：
粘液細胞ムチン H.pylori

项目摘要

平成11年度は,発現クローニング法を用いてヒト胃のcDNAライブラリーより単離したα1,4-N-アセチルグルコサミン転移酵素(α4GnT)の特性について解析した.まず,胃粘膜を含む種々のヒト正常組織におけるα4GnTの発現部位を調べるため,α4GnTのC末端側17個のアミノ酸残基に対する特異抗体を作製し,免疫組織化学的に解析した.その結果,この酵素は胃粘膜の副細胞,幽門腺,十二指腸のブルンネル腺,胃粘膜化生を示した膵管上皮のゴルジ野で特異的に発現していたが,他の細胞では全く検出されなかった.副細胞のようなα4GnTを発現している粘液細胞では実際にGlcNAcα1→4Galβ残基を含む粘液が産生されていることから,in vivoにおいてもα4GnTはこの糖鎖の生合成に重要な役割を演じていることが明らかになった.次にGlcNAcα1→4Galβ残基がH.pyloriの接着に及ぼす影響を解析するため,H.pyloriは接着するがGlcNAcα1→4Galβ残基は発現していない胃癌培養細胞,AGS細胞に対して,α4GnT cDNAの遺伝子導入前後におけるH.pyloriの接着性の変化について解析した.その結果,H.pyloriのAGS細胞に対する接着性は遺伝子導入前後で有意な変化がなく,GlcNAcα1→4Galβ残基がH.pyloriの接着に積極的に関与する結果は得られなかった.さらにStanford G3 Radiation Hybrid Panelを用いた解析により,α4GnT遺伝子の染色体上の座が3p14.3であることを示した.ごく最近,私達はα4GnTが胃癌や膵癌細胞でも発現していることを見出した.今後はこのような癌細胞におけるGlcNAcα1→4Galβ残基の発現意義を明らかにしたい.

在1999年，我们使用表达克隆方法分析了从人胃cDNA文库中分离出的α1,4-N-乙酰葡萄糖氨基转移酶（α4GNT）的特性。首先，为了研究包括胃粘膜在内的各种正常人体组织中α4GNT的表达位点，为α4GNT的C-末端的17个氨基酸残基制备了特异性抗体，并通过免疫组织化学分析了。结果，该酶在胰管上皮的高尔基体区域中特异性表达，该酶显示出胃粘膜化生，但根本没有在其他细胞中检测到。表达α4GNT的粘液细胞实际上产生含有GlcNACα1→4GALβ残基的粘液。还揭示了α4GNT在该聚糖的生物合成中起重要作用。接下来，为了分析GlcNACα1→4GALβ残基对幽门螺杆菌粘附的影响，我们分析了α4GNTcDNA对胃癌细胞和AGS细胞的转染之前和之后分析了幽门螺杆菌的粘附变化，而不是粘附的AG，但不是GLCNACα1→4GALBALBALESUES。结果，幽门螺杆菌在幽门螺杆菌转染之前和之后没有明显的变化，并且没有结果使GlcNACα1→4GALβ残基积极参与幽门螺杆菌粘附。此外，使用面板的斯坦福G3辐射杂种分析表明，α4GNT基因的染色体基因座为3p14.3。最近，我们发现α4GNT也在胃和胰腺癌细胞中表达。我们想阐明这样的癌细胞中GlcNACα1→4GALβ残基表达的重要性。