発現クローニングで単離したα1,4-N-アセチルグルコサミン転移酵素の機能解析

通过表达克隆分离的α1,4-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶的功能分析

• 批准号: 11159204
• 负责人: 中山 淳
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11159204/
• 关键词: 粘液細胞; ムチン; H.pylori

平成11年度は,発現クローニング法を用いてヒト胃のcDNAライブラリーより単離したα1,4-N-アセチルグルコサミン転移酵素(α4GnT)の特性について解析した.まず,胃粘膜を含む種々のヒト正常組織におけるα4GnTの発現部位を調べるため,α4GnTのC末端側17個のアミノ酸残基に対する特異抗体を作製し,免疫組織化学的に解析した.その結果,この酵素は胃粘膜の副細胞,幽門腺,十二指腸のブルンネル腺,胃粘膜化生を示した膵管上皮のゴルジ野で特異的に発現していたが,他の細胞では全く検出されなかった.副細胞のようなα4GnTを発現している粘液細胞では実際にGlcNAcα1→4Galβ残基を含む粘液が産生されていることから,in vivoにおいてもα4GnTはこの糖鎖の生合成に重要な役割を演じていることが明らかになった.次にGlcNAcα1→4Galβ残基がH.pyloriの接着に及ぼす影響を解析するため,H.pyloriは接着するがGlcNAcα1→4Galβ残基は発現していない胃癌培養細胞,AGS細胞に対して,α4GnT cDNAの遺伝子導入前後におけるH.pyloriの接着性の変化について解析した.その結果,H.pyloriのAGS細胞に対する接着性は遺伝子導入前後で有意な変化がなく,GlcNAcα1→4Galβ残基がH.pyloriの接着に積極的に関与する結果は得られなかった.さらにStanford G3 Radiation Hybrid Panelを用いた解析により,α4GnT遺伝子の染色体上の座が3p14.3であることを示した.ごく最近,私達はα4GnTが胃癌や膵癌細胞でも発現していることを見出した.今後はこのような癌細胞におけるGlcNAcα1→4Galβ残基の発現意義を明らかにしたい.

Pp.47-53 11 は, 発 ク ロ ー ニ ン を グ method with い て ヒ ト stomach の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー よ り 単 from し た alpha 1, 4 - N - ア セ チ ル グ ル コ サ ミ ン planning shift enzyme (alpha 4 GNT) の features に つ い て parsing し た. ま ず, gastric mucosa を む 々 species. の ヒ ト normal tissue に お け る alpha 4 GNT の 発 now parts を adjustable べ る た め, Alpha 4 GNT の C side at the end of 17 の ア ミ ノ acid residues に す seaborne る し the specific antibody を cropping, immunohistochemical に resolution し た. そ の results, こ の enzyme の vice は gastric mucosa cells, pyloric gland, duodenal の ブ ル ン ネ ル gland and gastric mucosa metaplasia を shown し た Cui epithelial の ゴ ル ジ wild で specific に 発 now し て い た が, he の cells で は full く 検 Go to されな った. Deputy cells の よ う な alpha 4 GNT を 発 now し て い る mucous cells で は be interstate に GlcNAc alpha 1-4 gal beta residues を containing む mucus が produce さ れ て い る こ と か ら, the in vivo に お い て も alpha 4 GNT は こ の sugar lock の biosynthesis に cut を play important な service じ て い る こ と が Ming ら か に な っ た. Time に GlcNAc alpha 1-4 gal beta residues が H.p ylori の に and then ぼ す effect を resolution す る た め, H.p ylori は then す る が GlcNAc alpha 1-4 gal beta residues は 発 now し て い な い gastric cancer cultured cells, AGS cells に し seaborne て, alpha 4 GNT Traces of cDNA の 伝 child before and after the import に お け る H.p ylori の then sex の variations change に つ い て parsing し た. そ の results, H.p ylori の AGS cells に す seaborne る then sex は heritage 伝 child before and after the import で intentionally な variations change が な く, GlcNAc alpha 1-4 gal beta residues が H.p ylori の then に positive に masato and す Youdaoplaceholder0 result られな られな った った. Youdaoplaceholder3 Stanford G3 Radiation Hybrid Panel を with い た parsing に よ り, alpha 4 GNT heritage 伝 son の chromosome の world が 3 p14. 3 で あ る こ と を shown し た. ご く recently, private da は alpha 4 GNT が stomach や Cui cancer で も 発 now し て い る こ と を shows し た. In the future, the significance of the における <s:1> <s:1> <s:1> ような ような the におけるGlcNAcα1→4Galβ residue <e:1> in the ような cancer cells is を clear ら に に た た に.

项目成果

中川 淳: "Expression cloning of a human α1,4-N-acetylglucosaminyl transferase that forms Glc NAcα1→4 Galβ→R, a glycan specifically expressed in the gastric gland mucous cell type m*ci*"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97. 8991-8996 (1999)

Jun Nakakawa：“形成 Glc NAcα1→4 Galβ→R（一种在胃腺粘液细胞类型 m*ci* 中特异性表达的聚糖）的表达克隆”Proc Natl。美国。97。8991-8996（1999）

市川徹郎: "Expression of N-acetyllacosamine and β1,4-galactosyl transferase (β4GalT-1) during adenoma-carcinoma sequence in the human colorectum"J. Histochem. Cytochem.. 47. 1593-1601 (1999)

Tetsuro Ichikawa：“人结直肠腺瘤-癌序列中 N-乙酰基乳糖胺和 β1,4-半乳糖基转移酶 (β4GalT-1) 的表达”J. Histochem. 47. 1593-1601 (1999)