転写コアクチベーターMBFによる転写活性化機構の解析

转录共激活因子MBF分析转录激活机制

• 批准号: 11160220
• 负责人: 上田 均
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11160220/
• 关键词: 転写コアクチベーター; TBP; TFIIA; 転写制御; タンパク質間相互作用

GCN4と相互作用するMBF1の領域を決定するため、GCN4のMBF1との相互作用能が低下した変異株R245AあるいはR245QをサプレスするMBF1変異株を酵母の遺伝学的手法を用い1個のサプレッサー変異株を得た。また、MBF1と相互作用するTBPの領域を決めるため、GCN4機能特異的に転写活性能が低下するTBPの変異株をスクリーニングし、11個のTBP変異株を得て解析を進めている。MBF1と相互作用するショウジョウバエ因子を新たに検索するため、Flagタグを付けたMBF1をショウジョウバエで発現できるトランスジェニックフライを作成した。このトランスジェニックフライ系統の胚核抽出液を調整し、Flag抗体レジンを用いFlag-MBF1に結合する因子を精製し、アミノ酸配列を決定した。この配列をもとに、データベースを検索したところ、この因子はAPTというbZip蛋白であった。APT全長およびbZip領域を用いたin vitro結合アッセイで、MBF1との結合が確認された。また、MBF1変異株は、APT変異株での気管系形成異常をエンハンスすることが明らかになり、ATPの作用にMBF1が関与することが示唆された。MBF2と弱いホモロジーを有する因子をカイコから2個、ショウジョウバエから2個見いだした。これらは、いずれもエリ蚕MBF2で保存されている領域内に保存されてる領域が存在した。ショウジョウバエの2個の因子についてGST pull down法でMBF1との結合能を調べたところ、カイコMBF2と同様の結合能を示した。この結果から、MBF2は、ファミリーを形成している因子であることが推定された。

GCN4 and MBF1 interaction domain determination, GCN4 and MBF1 interaction energy is low, R245A and R245Q are different, MBF1 is different, yeast genetic techniques are used, and different strains are obtained. TBP domain resolution, MBF1 interaction, GCN4 function-specific activity reduction, TBP variant resolution, 11 TBP variant resolution MBF1 interaction with other factors, such as new detection, Flag generation, MBF1 interaction with other factors, and MBF1 interaction with other factors. Flag-MBF1 binding factor is used to refine the Flag-MBF1 binding factor and determine the sequence of the Flag-MBF1 binding factor. This is the first time that I've ever seen a woman. APT full length and bZip field are used in vitro combination with MBF1 and confirmed. For example, MBF1, APT, and other plants, the formation of abnormal gas piping is not possible. MBF2 has two weak points and two weak points. This is the first time that the world has ever seen such a thing. The two factors in the GST pull-down method show that MBF1 and MBF2 have the same binding energy. The result is that MBF2 is the most important factor in the formation of a complex system.

项目成果

三島正規: "Resonance assignments, secondary structure and 15N relaxation data of the human transcriptional coactivator hMBF1(57-148)"J.Biomol NMR. 14. 373-376 (1999)

Masanori Mishima：“人类转录共激活因子 hMBF1(57-148) 的共振分配、二级结构和 15N 弛豫数据”J.Biomol NMR 14. 373-376 (1999)

尾崎淳: "Identification of the core domain and the secondary structure of the transcriptionalcoactivator MBF1"Genes Cells. 4. 415-424 (1999)

Jun Ozaki：“转录辅助激活因子 MBF1 的核心结构域和二级结构的鉴定”基因细胞。4. 415-424 (1999)。