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転写コアクチベーターMBFによる転写活性

转录共激活因子 MBF 的转录激活

基本信息

批准号：
10179220
负责人：
上田均
金额：
$ 1.34万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10179220/
关键词：
転写コアクチベーター TBP TFIIA 転写制御タンパク質間相互作用

项目摘要

転写コアクチベーターMBF1のTBPと相互作用する部位を同定するため、分子の表面に出ているアミノ酸残基21ヶ所をそれぞれアラニンに置換した変異体を作成した。そして、酵母GCN4によって誘導されるHIS3遺伝子の産物の阻害剤であるアミノトリアゾールに対する感受性を指標にして、アラニンに置換したMBF1変異体の活性を調らべた。その結果、3ヶ所の変異体、R89A(D70Nの変異も生じていた)、T108A、D112Aと、double変異体T108A/D112Aが、TBPと相互作用する部位である可能性が示唆された。GSTプルダウンアッセイを行なったところ、R89A、D112A、T108A/D112Aは、TBPとの結合能が低下していた。以上のことから、MBF1による転写活性化には、TBPとの直接の相互作用が重要で、その相互作用にMBF1のC末端部分の3番目のαヘリックスが少なくともかかわると考えられた。コアクチベーターMBF2は、カイコでしか見いだされておらず、同じ昆虫であるショウジョウバエですらカウンターパートは、見つかっていない。そこで、まずカイコの近縁種であるクワコとエリ蚕からホモログをクローニングした。クワコおよびエリ蚕MBF2の転写活性化能をAd2MLPプロモーターをテンプレートとしてin vitro転写系を用いて調べたところ、カイコMBF2と同様の活性化能を有しており、クローン化した遺伝子はMBF2であると結論した。一次構造を明らかにし、カイコMBF2と比較したところ、クワコMBF2は、97%のホモロジーを有していたが、エリ蚕MBF2は、極めて近縁種であるにもかかわらず、全体のホモロジーは、約50%で、4ヶ所にわかれて比較的保存された領域が存在した。以上のことから、MBF2は、特定の機能領域を除いて種間でかなり異なる領域のある因子であると考えられた。

The interaction between MBF1 and TBP is similar to that of the molecule, and the surface of the molecule is exposed to the acid residue 21. The yeast GCN4 and yeast HIS3 spores were used to block the activity of the HIS3 cells. The results showed that there were significant differences in the results of the test results, R89A (D70N), R89A (D70N), D112A (D112A), double (T108A/D112A), and TBP interactions. The combination of GST, R89A, D112A, D112A, TBP, and so on, can reduce the frequency of each other. The above three parts, MBF1, direct interaction, important interaction, interaction, C-terminal part of MBF1, α-terminal, alpha-terminal, and so on, respectively. MBF2, insect, insect. In recent years, there have been several kinds of training programs, such as those of other countries. The activity of MBF2 writing in silkworms is different from that of other silkworms. It can be used to describe the activity of silkworms, such as MBF2, silkworms, silkworms, sil At one time, there is a significant difference between the two groups in terms of MBF2, MBF2, 97%, MBF2, and so on. There are significant differences between the two groups in the field of conservation. The above parameters, such as MBF2, and specific mechanical fields, can be used to eliminate the factors in the field of inter-passenger transportation and transportation in the field of transportation.