耐塩性植物創製をめざした微生物酵素遺伝子の探索および利用・開発

寻找、使用和开发微生物酶基因以培育耐盐植物

• 批准号: 11876070
• 负责人: 森 信寛
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11876070/
• 关键词: コリン酸化酵素; アルカリ性; 第4級アンモニウム化合物; コリン; グリシンベタイン; γ-ブチロベタイン; トリメチルアミノ-1-ブタノール

コリンを炭素および窒素源としたpH10の培地を用いて土壌試料より微生物を114株(細菌53株,放線菌14株,糸状菌47株)分離した.細菌,放線菌は液体培地中での生育は非常に遅かった.生育の良好であった糸状菌3株について酵素活性を測定したところNAD(P)依存性およびPMS依存性コリン脱水素酵素活性はなく,強い酸化酵素活性が見られた.酸化酵素活性が最も強かったV-2株を選定し,本菌の生産するコリン酸化酵素を硫安分画,イオン交換およびゲル濾過クロマトグラフィーで精製した.精製酵素標品の純度をNative-PAGEで検討したところ約95%の純度であった.この標品を用いて酵素の性質を検討した.本酵素はコリン以外にベタインアルデヒド,Trimethylamino-1-propanol,Dimethylamino-1-propanol,Dimethylaminoethanolを酸化した.コリン,ベタインアルデヒドに対するKm値は0.28,0.30mMであった.本酵素反応の最適pHは9〜10.5,最適温度は35〜40℃であった.酵素を各pHで30℃,10分間の処理を行い,残存活性を測定したところ,pH8.5〜9.5付近で安定であった.また,pH9.5で各温度で10分間処理したところ30℃までは安定であったが,40℃で60%,45℃で10%の活性となった.ゲル濾過法で求めた分子量は128,000であった.また,フラビン特有の吸収スペクトルを示し,その極大吸収は340,450nmであった.

コ リ ン を carbon お よ び smothering element source と し た pH10 の petty を with い 壌 て soil sample よ り microbial を 114 strains (14 strains of 53 strains of bacteria, actinomyces, si bacteria strains of 47) separation し た. Bacteria, actinomyces は liquid petty で の fertility は very に 遅 か っ た. Good birth の で あ っ た si form 3 strains に つ い て determination of enzyme activity を し た と こ ろ NAD (P) dependence お よ び PMS dependency コ リ ン dehydrated vegetable enzyme activity は な く, stronger い acidification enzyme activity が see ら れ た. Strong acidification enzyme activity が the も か っ た V - 2 strains を し selected, this bacterium の production す る コ リ ン acidification enzyme を sulfur content, イ オ ン exchange お よ び ゲ filtration ク ル ロ マ ト グ ラ フ ィ ー で refined し た. Refined enzyme mark product purity の を Native - PAGE で beg し 検 た と こ ろ about 95% purity の で あ っ た. こ の label product を い の て enzyme properties を beg し 検 た. Beyond this enzyme は コ リ ン に ベ タ イ ン ア ル デ ヒ ド, Trimethylamino - 1 - propanol, Dimethylamino - 1 - propanol, Dimethylaminoethanol を acidification し た. コ リ ン, ベ タ イ ン ア ル デ ヒ ド に す seaborne る Km numerical は 0. 28, 0.30mm であった. The optimal pH of this enzyme is であった 9-10.5, and the optimal temperature is であった 35-40℃であった. Enzyme を pH で 30 ℃, 10 points between の 処 を line い, determination of residual activity を し た と こ ろ, pH8.5 ~ 9.5 paying nearly で settle で あ っ た. ま た, pH9.5 で で 10 points between each temperature 処 Richard し た と こ ろ 30 ℃ ま で は settle で あ っ た が, 40 ℃ で 60%, 45 ℃ で 10% の active と な っ た. ゲ ル filter way で o め た は molecular weight 128000 で あ っ た. ま た, フ ラ ビ ン の unique suction 収 ス ペ ク ト ル を し, そ の maximum absorption 収 は 340450 nm で あ っ た.